高侵袭力及稳定高表达增强型绿色荧光蛋白的膀胱癌细胞株的建立.pdfVIP

· l026 · 第21卷 第 10期 医学 研 究 生 学 报 Vo1．21 No．10 2008年 10月 JournalofMedicalPostgraduates Oct．2o08 · 论 著 · 高侵袭力及稳定高表达增强型绿色荧光蛋白的 膀胱癌细胞株的建立 杨德林 ， 宋 波 ， 王剑松 ， 张 超 ， 徐鸿毅 (1．昆明医学院第二附属医院泌尿外科，云南昆明650101；2．第三军医大学西南医院泌尿外科， 重庆 400038) 摘要： 目的：建立具有高侵袭力及稳定高表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的膀胱癌细胞株。 方法：通过构建 侵袭小室，以穿透人工基底膜、聚碳酸脂膜能力为依据，筛选从人膀胱癌细胞系EJ中筛选具有体外高侵袭能力的 膀胱癌细胞亚系(EJ—m3)。用pEGFP—C1转染人膀胱癌细胞系EJ及其高侵袭力亚系，经 G418抗性筛选和96孑L 板有限稀释获得稳定高表达EGFP的单克降细胞株。并用流式细胞术检测EGFP表达率 ，通过细胞周期、生长曲 线和体外侵袭实验，对转染和未转染 EGFP的细胞生物学行为进行综合分析。 结果：筛选出了具有高侵袭力的 膀胱癌细胞EJ—m3，并获得了稳定高表达EGFP的细胞株EJ．GFP和EJm3一GFP。该两株细胞EGFP的表达率均 为99．9％，增殖指数、生长曲线和体外侵袭力与未转染前相似 (P0．05)。 结论 ：用改良侵袭实验筛选膀胱癌 细胞系的高侵袭力亚系的方法是可靠的。转染EGFP的细胞其生物学行为并未发生改变。所获得的具有高侵袭 力和稳定高表达EGFP的膀胱癌细胞为膀胱癌侵袭及转移的研究提供了良好的实验平台。 关键词： 膀胱癌细胞； 侵袭力； 绿色荧光蛋白 中图分类号： R737．14 文献标识码： A 文章编号： 1008．8199(2008)10—1026-04 EstablishmentofahighlyinvasivehumanbladdercancerceUline withenhancedexpressionofgreenfluorescentproteingene YANGDe—lin ，SONGBo ，WANGJian—song。 ZHANG Chao ，XU Hong．yi ， (1．DepartmentofUrology，theSecondHospitalofKunmingMedicalCollege，Kunming650101，Yun— nan，China；2．Departmentof Urology，XinanHospital，theThirdMilitaryMedicalUnivisity， Chongqing400038，China) Abstract：Objective：Toestablishahighlyinvasivehumanbladdercancercelllinewithenhancedex— pressionofthegreenfluorescentprotein(EGFP)gene． Methods：Byusingaspeciallyconstructedin— vasivechamber，theEJcellsthathadpenetratedthematrigelandpolycarbonateadiposememb ranewere selectedandculturedtoestablishoffspringcelllineswithhighinvasivepower．Humanbladdercancercell lines(EJandEJ—m3)weretransfectedwithpEGFP—C1byLipofectamine 2000reagent，andscreenedby theculturemedium containinggeneticin (G418)andlimiteddilut