用细胞膜色谱法筛选红毛七中血管生成抑制作用地部位.pdfVIP

23(增刊)，2003 59 用细胞膜色谱法筛选红毛七中血管生成抑制作用的部位 李义平贺浪冲 (西安交通大学天然药物研究与工程中心陕西西安 721006) Membrane 细胞膜色谱(Cell 胞膜色谱筛选与传统天然药物化学的分离相结合，可以快速分离得到活性部位和活性成分，通过药效试验 确定为有效部位和有效成分。该文报道用人血管内皮细胞膜色谱模型筛选秦巴山区特有植物红毛七中抑制 血管生成作用的有效部位。 1仪器与试药 ZK一401型低温冷冻高速离心机(德国)； Rheodyne公司)；ANASTAR色谱工作站(奥泰科技有限公司)；HERMLE 南巩义市英峪予华仪器厂)；DG5031型酶联免疫检测仪(南京华东电子集团股份有限公司)。 1．2试药RPMI一1640培养基(Life 噻唑盐(MTT)(Sigma 工集团)；三重蒸馏水(实验室自制) 红毛七为小檗科牡丹草属植物类叶牡丹Leonrice 山区太白县太白山。经西安交通大学药学院生药教研室吕居娴教授鉴定。 人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)(购自中国科学院上海细胞生物研究所)。 2方法与结果 2．1筛选条件 流速：0．2mL·min～；用流动相平衡后，进样分析。 2．2红毛七活性部位的筛选 液，回收乙醇。取适量红毛七总提取物用甲醇溶解，为红毛七总提取物供试品溶液(HMQZ)。取红毛七总提 取物，加适量水溶解后，以5％稀盐酸调pH值为2—3，酸水液用氯仿萃取，回收溶剂，用适量甲醇溶解， 量甲醇溶解，为红毛七总碱供试品溶液(HMQB)。 uL，注入血管CMC系统分 2．2．2血管内皮细胞膜色谱筛选分别吸取供试品液(HMQZ，HMQA，HMQB)5 2．2．3 HMQB的分离与筛选经薄层层析确定分离条件，以硅胶为填料，不同比例的氯仿和甲醇为洗脱剂进 u 试品液(HMQB-1，HMQB一2，HMQB一3，HMQB一4)5L，注入血管CMC系统分析。以大黄素为对照，结果显 在血管内皮细胞膜色谱模型上有保留的活性部位。 60 药物分析杂志 ———r——1F——否——1广———丁——1f——1■——苫r— Minute5 Minutt5 图1大黄素(A)、HMOB(B)在血管内皮CMC柱上的保留色谱图 卜大黄素；2一删QB 1 of theECV304CMCcolumn emodin(A)andHMQB(B)on FigChromatograms 1-emodin：2一删QB Minute5 图2 HMQB-2在血管内皮CMC柱上的保留色谱图 2 ontheECV304CMCcolumn of咖QB一2 Fig Chromatograms 删QB一2具有显著的抑制ECV304细胞增殖的作用。 水 褂70 粪60 50 40 30 20 10 0