耐尔蓝荧光探针法测定核酸.pdfVIP

第27卷增刊 福州大学学报(自然科学版) V01．27 1塑皇生2旦 !!兰些!!坚里坚业!墅墅!!熊!堂!!坚!!!坐!!!) 墨塑：!!塑 耐尔蓝荧光探针法测定核酸 陈秋影，杨黄浩，李东辉，郑洪，朱庆枝，许金钩 (厦门大学化学系，福建厦门36]005) 攘耍：基于DNA或RNA对耐尔蓝荧光的猝灭效应。建立一种新的DNA或RNA的测定方法． 在最优条件下。测定小牛胸腺DNA，蛙鱼精子DNA、鲱鱼精于DNA和酵母RNA的线性范围 Jag／mL，9．0 ng／mL，相对标准差 m3ng／mL．检测限分别是3．0 n8／mL、5．4ng／mL和27 似=6)是2．1％．本文还讨论了干扰物质的影响． 美建饲：荧光探针；耐尔蓝；核酸；红区 中圈分类号：0657．3 文献标识码：A l实验方法 于10mL容量瓶中加入1．0mL六次甲基四胺(Hn—Hc】(含O．1tool／L六次甲基四胺) Bill／673 刻度，摇匀，室温下放置5min后，在^。／^。。=630nm下分别测定试样及空白 溶液的荧光强度F和凡，以“一F值对CTDNA或RNA浓度作图． 2 DNA(或RNA)对耐尔蓝荧光光谱的影响 在DNA(或RNA)存在条件下，耐尔蓝的最大激发波长发生红移(633rim)，而发射波长 不发生变化，只是峰的荧光强度降低． 3分析条件优化 大．在本实验中，我们选择NB浓度为1．0#tool／L 4工作曲线、检出限及精密度 DNA(FSDNA)和酵母RNA(yeastRNA)浓度作图，得工作曲线．工作曲线的线性范围、方 法的检测限及线性相关系数见表1． 收稿日期：199螂6_17 作者简介：陈秋影(1973-)，女，博士研究生． 基金项目：国家自然科学基金资助项目 ．106· 福州大学学报(自然科学版) 第27卷 5合成样的测定 一定量的DNA或RNA在干扰物质存在下测回收率，结果见表2． 表1本法的分析参数 核酸 线性范围／飕·mL-1 检出限／ng·mL-1 线性相关系数 CTDNA 0．0～04 3．0 0．998 0．4～2．0 0．999 SMDNA 0．0—0，4 9．0 0999 04—2．0 0．995 00～0，3 0．993 FSDNA O．3～1．0 5．4 0．995 1．0～5．0 0．995 YeastRNA 0．0～40 0．994 4．0--10 27 0．999 表2合成样的测定 注：干扰物质浓度：BSA2．5旭／mL；Po}1．0pmol／L；IgGo．1卢昌／mL；A，T．C2．5飕／nil Go．1弘g／mL；Mn2+，Ca“0．5pmol／L；M矿0．2^anol／L；Cu“0．4grnol／L