胶体金免疫层析方法快速检测腹泻性贝毒软海绵酸的初步研究.pdfVIP

维普资讯 第 27卷第 7期 分析试验室 V01．27．No．7 2008年 7月 C neseJournalofAnalysisLaboratory 2oo8．7 胶体金免疫层析方法快速检测 腹泻性贝毒软海绵酸的初步研究 刘仁沿 ，梁玉波 ，陈冰君 ，许道艳 ，梁 斌 (1．大连海事大学环境科学与工程学院，大连 116026；2．国家海洋环境监测中心，大连 116023) 摘 要：建立了赤潮毒素腹泻性贝毒软海绵酸的快速胶体金免疫层析检测方 法。通过细胞融合，制备抗软海绵酸单克隆抗体，胶体金标记抗体，建立快速 检测软海绵酸的免疫层析试纸条方法。检 出限500ng／mL(50ng／条)，探讨 了影 响测试方法的因素和提高灵敏度的可能手段。 关键词：软海绵酸；单克隆抗体；胶体金 中图分类号 ：0658．1 文献标识码：A 文章编号：1000．o72o(20o8)o7．026．04 赤潮灾害 日益严重，已成为一种全球性的海 抗原的特异性结合建立的分析方法，具有灵敏度 洋生态灾害。对海洋生态和渔业资源造成 了巨大 高，特异性强，仪器设备简单易掌握，样品前处理 损害。腹 泻性 贝毒 (DiarrheticShellfishPoisoning， 相对简单等优点，适于现场监测和大量样本快速 DSP)是由有毒赤潮藻类鳍藻属(Dinophysis)和原甲 筛查，因而，近年在分析化学领域受到极大的重 藻属(Pmrocentrum)产生的一类脂溶性多环醚类天 视和迅速发展_3，引。国际上主要是关于腹泻性贝毒 然化合物，腹泻性贝毒的主要成分是软海绵酸 的酶联免疫检测技术 的研究报道 (Enzyme—linked (Okadaicacid，OA)及其衍生物。腹泻性贝毒靠激 immunosorbentassay，ELISA)，现已有售德国、13本 发磷酸化来控制大肠细胞 内钠的分泌而引起腹泻， 等公司生产的ELISA检测 DSP的试剂盒。尚未见 是蛋白磷酸酶PP1A和 PP2A的强烈抑制剂，也是 应用免疫层析技术用于分析 DSP的报道。本文用 一 种很强的促癌剂，能引起消化道肿瘤的发生…。 胶体金标记抗体，通过竞争免疫反应，进行快速 目前 ，腹泻性贝毒的分析方法主要有生物小 鼠法， 检测软海绵酸的免疫层析试纸条方法的初步研究。 高效液相色谱法，以及一些免疫化学方法。其中 1 实验部分 生物小鼠法简便易行，适合于大规模、批量样品 1．1 仪器与试剂 的检测，该法的缺点是不能区别毒素的种类和结 软海绵酸 (OA)、水溶性碳化二亚胺 (EDC)、 构、干扰大、不精确；现在应用广泛、方法完善的 N一羟基琥珀酰亚胺 (NHS)、牛血清 白蛋 白(BSA)、 高效液相色谱法 (HPLC)已被许多国家采用，腹泻 卵清 白蛋 白(OVA)、Freunds完全和不完全佐剂、 性贝毒可采用香豆素衍生法和9一蒽基叠氮 甲烷法 HAT、HT培养液、胎牛血清、聚乙烯醇 (PVA)、 以及液一质联机等方法分析，高效液相色谱分析法 PEG(Polyethyleneglyco1)均购 自Sigma公司；RPMI一 可准确给出毒素的含量和种类，检出限可低~ng／g 1640购 自Gibco公司；辣根过氧化物酶 (HRP)标记 级，缺点是样品前处理繁琐费时，仪器昂贵，且需 羊抗 鼠IgG购 自华美公司。膜(PRTMA85)、胶体金 要专门的分析技术人员 J。建立快速、灵敏的赤潮 垫(33glass)、吸水纸 (470纸)和样品垫 (33glass)均 毒素检测方法对于推动有毒赤潮