毛细管电泳的PMP非衍生化间接检测单糖研究.pdfVIP

第1‘届全国电分析化学会议论文集 纳米电分析、电化学检测器件 F92毛细管电泳的PMP非衍生化间接检测单糖 刘海燕许雪琴王伟付凤富+ (福州大学食品安全分析与检测技术教育部重点实验室，化学化工学院) 1．前言l 糖类是细胞中非常重要的一类有机化合物，根据其功能基团的不同可分成醛 糖、酮糖、糖醇和糖醛酸，根据其糖残基数目的多少又可分为单糖、寡糖和多糖。 单糖组成分析是糖分析的一项重要内容。由于多数糖类物质不具备光学性质，在 通常条件下也不带电荷，，因此对糖类物质采用色谱或电泳方法进行分离测定时， 常用紫外或荧光试剂对糖类物质进行衍生，以改善其光学活性，提高检测灵敏度。 具有强紫外吸收的1．苯基．3．甲基．5．吡唑啉酮(PMP)作为一种单糖衍生试剂近 年来被广泛用于单糖的检测分析【11。但是衍生过程步骤较多，过程繁琐(79浴加 热，真空干燥，氯仿萃取，离心)并且是含有羧酸基团的单糖在毛细管电泳分离 过程中出峰时间较长，这些都成为PMP衍生化检测的缺点。 本研究的主要目的是建立一种毛细管电泳检测单糖的新方法，即利用PMP 作为背景电解质，无需衍生对含有羧酸基团的单糖进行间接分离检测。 2．方法： 在下面的条件下：25℃，以5raMNa2HP04+10mMPMP为缓冲液，并用 105，Lumex)对N．乙 压力为21kV。利用毛细管电泳．紫外可见检测技术(Capel 酰神经氨酸【2】，N．乙酰胞壁酸，D．葡萄糖醛酸，D一半乳糖醛酸四种单糖进行分析 测定。 3．结果与讨论： 3．1缓冲液种类选择 四种单糖在同样条件下，利用硼砂作为缓冲液时不会出峰，在NaH2PO。缓 冲液下迁移时间较长，而在Na2HPO。缓冲液下迁移时间较短且峰型比较好看。 3．2PMP浓度确定 在含PMP为2．SmML20mM的缓冲液下对各组分的分离检测进行了研究， 实验结果表明当PMP的浓度为10mM时结果最佳。浓度低于10mM时，四个 单糖不能完全出峰；而浓度高于10mM时，四个单糖的分离度逐渐减小，不能 完全分离。 3．3NazHP04浓度确定 我们考察了不同浓度的Na2HP04缓冲液(1．25mM～15mM)对各组分迁移行为 的影响，如图lA所示，当Na2HP04浓度为5mM时，出峰时间较短且分离度良 好，所以选其为缓冲液最佳浓度。 3．4 pH值确定 如图lB所示，随着缓冲液pH的升高，四种单糖的出峰时间不断增加，分 离度增大，灵敏度也不断增强，但当pH12．25，峰型变得不对称，因此选择pH 值为12．25。 3．5分离电压的确定 647 第十届全国I毡分析化学会议论文集 纳米电分析、电化学检测器件 考察了15kV-25kV范围内的分离电压对各组分迁移行为的影响。电压低时， 迁移时间延长，综合比较后选择21kV为最佳分离电压。 在上述最佳条件下，四种单糖得到完全分离(图2)。 图1(A)Na2HPO。缓冲液对各单糖分离的影响；(B)缓冲液pH值对各单糖分离的影响 圳∞ ∞ o 锄 瑚 —峨 6 7 e 9 10 11 12 图2：四种单糖标准物质的毛细管电泳谱图 参考文献： ofthe Honda，KazutakaTogashi，KanaUegaki，AtsushiTaga．Enhancement 【1】Susumu as of d