第八章蛋白表达系.pptVIP

1.酵母表达系统的特点 酵母是一种单细胞低等真核生物，培养条件普通，生长繁殖速度迅速，用于表达基因工程产品时，可以大规模生产，有效降低了生产成本。 1.酵母表达系统的特点 酵母表达外源基因具有一定的翻译后加工能力，收获的外源蛋白质具有一定程度上的折叠加工和糖基化修饰，性质较原核表达的蛋白质更加稳定，特别适合于表达真核生物基因和制备有功能的表达蛋白质。 1.酵母表达系统的特点 某些酵母表达系统具有外分泌信号序列，能够将所表达的外源蛋白质分泌到细胞外，因此很容易纯化。 1.酵母表达系统的特点 应用酵母表达系统生产外源基因的蛋白质产物时也有不足之处，如产物蛋白质的不均一、信号肽加工不完全、内部降解、多聚体形成等，造成表达蛋白质在结构上的不一致。 另外，还时常遇到表达产物的过度糖基化情况。 解决内部降解的方法有三： 一是在培养基中加入富含氨基酸和多肽的蛋白胨或酪蛋白水解物，通过增加酶作用底物来缓解蛋白水解作用； 二是将培养基的pH值调成酸性(酵母可在pH3.0~8.0的范围内生长)，以抑制中性蛋白酶的活性； 三是利用蛋白酶缺失酵母突变体进行外源基因的表达。 2.常用酵母表达系统(宿主-载体系统) （1）酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表达系统 （2）甲醇营养型酵母表达系统? （3）裂殖酵母(Schizogenesis pombe)表达系统 （1）酿酒