微流控芯片分选精子研究的论文.pdfVIP

CMs82008 微流控芯片分选精子研究1 王维黎维生周小棉※ 广州医学院附属市第一人民医院，510180 获得优质的精子是进行人工夫精授精(in-vitrofertilization，ⅣF)、人工授精(ionintra cytoplasmic sperminject，ICSI)等辅助生殖技术的重要环节。传统的精子分离方法有精子上游法、密度梯度离心 分离法及玻璃纤维过滤法等【ll。由于这些精子分离技术各有优缺点，尚难尽人意。发展新的对精子无 损伤的分离技术已成为改善ICSI和IVF成功率的迫切需要。本文利用在微纳米尺寸的管道中流动的液 体具有层流的特性，即各层液流彼此互不干涉的流动原理制作微流控芯片，对活动精子进行分选， 获得理想的效果。现报告如下。 材料与方法 一、材料 购自国药集团化学试剂有限公司。SCA精子质量分析系统(西班牙)。PDMS微流控芯片由本实验室 研制。 2．精液标本收集精液标本来源于本院生殖不孕不育专科就诊的男性不育症患者45例，年龄 37C水浴箱内液化，液化后按WHO标准进行精液常规分析。 3．微流控芯片 3．1微流控精子分选装置设计原理利用不同流体在微纳米尺寸的管道中形成层流的物理现象 设计芯片。活动能力大于一定值的精子从原液中通过层流面游到另一个液流中，不活动的精子和圆 细胞及精液中的其它杂质被保留在原液中，从而实现对活动精子的分选。 3．2 500tam、所有管道深501ma．。 二、实验方法 1．精液质量分析按照WHO人类精液以及精子．宫颈粘液相互作用实验室手册(第四版)【3】的 标准对精液处理前后进行常规和形态分析，采用SCA精子质量分析仪和teja计数板做精子密度， 活力等各参数分析，精子形态分析采用巴士染色法染色。精子尾部肿胀率以200条精子中b～g型肿 胀精子百分率表示。 州医学院教学课题(068045)基金资助。 ※联系人简介： 周小棉，男，教授，主任技师，硕士生导师，从事毛细管电泳和芯片实验室的研究。 E-mail： zhouximi@yahoo．corn ·202· cMSB2008 的精子悬液接触PDMS 30rain后进行精子存活试验，用未接触PDMS的500山精子悬液作为对照。 将上述培养管、对照管置于5％C02、37C的培养箱中培养。隔24小时混匀精子悬液，并进行精子 计数，计算精子的存活率和活力。’ 3．微流控芯片分选精子 PBS缓冲液冲洗管道后，用I％BAS润洗两次，吸尽加样池和 3．1芯片管道的处理用pH7．4 收集池液体，然后用精子处理液充满管道水化5min。 后新鲜精液(n--40)，静置在37℃恒温箱30分钟后，吸取上收集池中收集液，对收集液中精子进 行活力分析、形态分析以及肿胀试验。 4．统计学分析数据分析采用SPSSl6．0统计软件，计量资料以x±s表示，组间比较采用配对t检 验，P0．05为差异有统计学意义。 结 果 1．PDMS微流控芯片对精子存活的影响对照组和PDMS处理组孵育24llr后，与孵育前比较，精 尾部肿胀率无明显差异(P0．05)(表1)。 表1PDMS微流控芯片对精子存活的影响(x±s) 2．芯片分离前后精子活力、形态以及尾部肿胀率的比较芯片分离后上收集池中收集液中的精 子在精子活力、精子形态以及尾部肿胀率方面与分离前精液中精子比较，差异均有统计学意义(表2)。 表2：30份精液芯片分离前后精子各参数比较(x±s) 讨 论 微流控芯片技术在辅助生殖方面的应用近年来在卵细胞和胚胎的培养上有所报道141。在精子的 分选上，ChoB等‘21利用微流控芯片对活动精子的分离回收率