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用磁珠富集法快速制备银鲫微卫星标记.pdf
第 22 卷第 6 期 大 连 水 产 学 院 学 报 Vol. 22 No. 6
2 0 0 7年 1 2 月 JOURNAL OF DAL IAN F ISHER IES UN IV ER SITY D ec . 2 0 0 7
·研究简报 · 文章编号 : 1000 - 9957 (2007) 06 - 0460 - 05
用磁珠富集法快速制备银鲫微卫星标记
姬 长 虹1、2 , 孙 效 文1
( 1. 黑龙江水产研究所 农业部北方鱼类生物工程育种重点开放实验室 ,黑龙江 哈尔滨 150070;
2. 大连水产学院 生命科学与技术学院 ,辽宁 大连 116023)
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摘要 : 将磁珠富集法和用 γ- P标记的放射性探针法相结合 , 快速制备银鲫 Ca rass ius au ra tus g ibelio微卫
星 。用限制性内切酶 M bo I对银鲫完整基因组 DNA 酶切 , 用不同蔗糖浓度梯度离心收集 400 ～900 bp 大小
的片段 , 连接 B rown接头 , 构建银鲫全基因组文库 。用生物素标记的 ( CA ) 16寡核苷酸探针进行筛选 , 磁
珠富集含有微卫星的 DNA 单链序列 ; 对 DNA 模板进行 PCR 扩增 , 连接 pMD 18 - T载体 , 转入用 CaCl 制
2
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备的感受态大肠杆菌 Escherich ia coli DH5α中 , 得到微卫星序列文库 ; 经用 同位素 γ- P 标记 的探针
(CA ) 16二次筛选 , 获得 235个阳性克隆 , 对其测序 , 得 224 个含微卫星序列 , 完美型 、非完美型 、复合型
序列分别占总数的 52 8% 、287% 、185% 。除探针中使用的 ( CA / GT) n 重复单元外 , 还观察到 ( GA /
) ( )
CT n 、 ACTC 4 的重复序列 。设计 163对引物 , 选择合成 30对引物 , 经聚丙烯酰胺凝胶筛选 , 9对可以获
得清晰条带 , 其中 3对为单态 , 6对为多态 。
关键词 : 银鲫 ; 微卫星 ; 磁珠富集
中图分类号 : S917; Q959468 文献标识码 : A
银鲫 Ca rass ius au ra tus g ibelio是鲫的近缘亚种 , 简便 、快速 , 整个过程可在 1周内完成 , 大大缩短
广泛分布于亚 、欧大陆的温带水域 , 在中国盛产于 了试验周期 , 且标记可 以用于银鲫的群体遗传分
黑龙江流域和新疆额尔齐斯河流域 。在 自然环境 析 , 从而丰富水产动物分子标记资源 , 为银鲫遗传
中 , 鱼的性比为 1 ∶1, 普通鲫为 4 ∶1, 银鲫为 9 ∶1。 多样性的检测等奠定基础 。
银鲫体细胞含 162 条染色体
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