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戊型肝炎疫苗相关的戊型肝炎病毒系列研究 孟继鸿1,2董晨1戴星1时成波2赵小琳2梁久红1汪源1张红梅1程 险峰1王松1邓蕾1张敏1董敏1付建光1， 田华1贺峰1李峰1徐明 杰1JPillot3YKhudyakov4HFields4 东南大学 戊型肝炎病毒(HepatitisEvirus，HEV)引起的戊型肝炎是一种经消化道传播的病毒 性肝炎，全球分布。我国新疆曾发生过世界上规模最大的流行，约12万人发病。据卫生部 法定传染病疫情报告，近年我国戊型肝炎病例明显增加。 5。‘’ A ；¨… C l mfectlonofA549cellswi廿I ofH“RN^111cultum A549ce¨shloculatedwithfecaI FIg H“(^．B)QuanfRatJon sup甜natan怛of supema． 协m(314×100copiesHEV剐q^)(A)ormCUInJ帕mectiumof阳s¨自酣HEV—InfectedA549恤¨slB)ValuesarEmea鸺ofduplicatedetermtna uons ofHEVORF2 theuninfectedA549 andHEV-^549cellsatthesecona lC．D)Immunof)uomscenceanalysis protein(Pen}in cells{CJ passage{D}Ma舯ificatlon：x400 二、HEv中和试验： 中和试验是中和抗体检测的主要手段。HEV体外生长缓慢，不产生CPE，很难建立HEV 中和试验。我们利用RT—PCR的敏感性，在国内外首次建立了一种基于PCR检测的HEV快速 中和试验。将100个PCR滴度的HEV与待检血清混合，孵育后接种PLC／PRF／5单层，吸附 2h后洗涤细胞，提取总RNA进行HEV RT—PCR检测，PCR阴性表示待检血清含HEV中和抗体， 阻断了HEV吸附至细胞。我们对不同来源的人和动物血清进行中和抗体检测，发现戊型肝炎 病人恢复期血清、HEV实验感染猴恢复期血清、HEV-ORF2编码蛋白动物免疫血清均能中和 HEV，而甲、乙、丙肝病人血清、HEV实验感染前和动物免疫前血清以及含HEV-ORF2和ORF3 线性抗原表位的嵌合蛋白免疫血清均不能中和HEV。 三、HEV中和抗原表位的发现和特征鉴定： 中和抗原表位是研发基因工程疫苗的重要依据。我们在建立HEV中和试验的基础上，先 价分别为1：10和1：320，发现截短蛋白诱导中和抗体的能力远大于全长蛋白。接着我们制 备了51个相互重叠、30aa长、覆盖C2蛋白的合成肽的抗血清，但中和试验全部阴性，说 明HEV中和抗原不是线性表位。我们再制备了31个长短不同的HEV-ORF2截短蛋白，见下图。 胀蜘鞠--’|ll咧ll“!u燃蠖66, 71 编码蛋白才能够诱导HEV中和抗体产生(见下图)，在国内外首次确定了HEV中和抗原表位 的位置和构型依赖性特征。 50 100150200 300 600 0 250 350枷4505∞ 550 650 —锱骥幕鞫嘉：璧，甄蓬赫茹瑟学羁麓鑫蔷璧拳琶霞糯一n ‘“一—嘴瀣糍鬻麓隧霭酱嗣譬譬函譬篮凿曹_黛． (’ Assay—_●■■■●。 一№NcuⅢtr，a。li—tionPosit{vc____■■—■——●——■—■嚣 卜 一NN。egu叭trai。li。zatj0“A8“7置量皇昌皇昌暑高昌罨囊昌墨昌暑，。暖一 FIG2Localizationotthe the Evirusdetectionofthe antit：xxIIesHE,／