质谱分析技术.pptVIP

用于蛋白质鉴定的两种基本的质谱分析技术 1）MALDI-TOF MS Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization/ 基质辅助激光解吸附离子化 Time-Of-Flight mass spectrometry 飞行时间 PMF: peptide mass fingerprinting 肽质量指纹谱 MW: 800-300,000 2）SELDI-TOF MS Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization 表面增强激光解吸附离子化 MW: 2,000-50,000 3）MS/MS Tandem MS串连质谱技术 MW: 200-3,000 1）MALDI-TOF MS（原理示意图） Source Length = s Field-free drift zone Length = D Ed = 0 Microchannel plate detector Extraction grid (source voltage -Vs) UV (337 nm) Detector grid -Vs Pulse voltage Analyte/matrix 用MALDI-TOF MS和数据库鉴定细菌蛋白GroEL PMF肽质量指纹谱鉴定蛋白质例子 Myoglobin GLSDGEWQQV LNVWGKVEAD IAGHGQEVLI RLFTGHPETL EKFDKFKHLK TEAEMKASED LKKHGTVVLT ALGGILKKKG HHEAELKPLA QSHATKHKIP IKYLEFISDA IIHVLHSKHP GDFGADAQGA MTKALELFRN DIAAKYKELG FQG Myoglobin用胰蛋白酶限制酶切后产生的肽段（从碱性氨基酸的羧基端切断） Myoglobin GLSDGEWQQV LNVWGKVEAD IAGHGQEVLI RLFTGHPETL EKFDKFKHLK TEAEMKASED LKKHGTVVLT ALGGILKKKG HHEAELKPLA QSHATKHKIP IKYLEFISDA IIHVLHSKHP GDFGADAQGA MTKALELFRN DIAAKYKELG FQG 胰蛋白酶酶切Myoglobin产生的肽段及其分子量 1811.90 GLSDGEWQQVLNVWGK 1606.85 VEADIAGHGQEVLIR 1271.66 LFTGHPETLEK 1378.83 HGTVVLTALGGILK 1982.05 KGHHEAELKPLAQSHATK 1853.95 GHHEAELKPLAQSHATK 1884.01 YLEFISDAIIHVLHSK 1502.66 HPGDFGADAQGAMTK 748.43 ALELFR 实际质谱分析所得的肽质量指纹谱 GLSDGEWQQVLNVWGK VEADIAGHGQEVLIR LFTGHPETLEK HGTVVLTALGGILK KGHHEAELKPLAQSHATK GHHEAELKPLAQSHATK YLEFISDAIIHVLHSK HPGDFGADAQGAMTK ALELFR 2）SELDI-TOF MS （原理示意图） EAM: 能量吸收分子 SELDI-TOF MS分析使用的各种蛋白质芯片 SELDI-TOF MA检测结果与处理 实例：鼻咽癌病人血清标志物检测 卵巢癌细胞培养液上清中分泌蛋白的SELDI-TOF MS检测分析 2）MS/MS串连质谱分析原理示意图 限制酶切蛋白质为肽段 Enzymatic Digest and Fractionation 第一步MS分离各个肽段第二步MS对其中的一个肽段进行氨基酸序列分析 MS/MS 碰撞诱导解离CID中多肽分子结构中键断裂的多种可能性 -HN-CH-CO-NH-CH-CO-NH- Ri CH-R’ bi yn-i yn-i-1 bi+1 R” i+1 i+1 ai xn-i ci zn-i 控制CID过程中的能量，使多肽主要从最弱的键---肽键处断裂产生N-端b系列和C-端y系列肽段 -HN-CH-CO-NH-CH-CO-NH- Ri Ri+1 bi yn-i yn-i-1 bi+1 串联质谱氨基酸序列分析例子肽段SGFLEEDELK在理想条件下可生成的b、y系列离子 MW ion ion MW 88 b1 S GFLEEDELK y9 1080