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mRNA差异显示方法的建立及条件优化.pdf
·289·
文章编号：1007—6611(2008)04—0289—04
mRNA差异显示方法的建立及条件优化
王小伟， 孙俊红， 籍晓元， 杜秋香， 王英元(山西医科大学法医学院病理学教研室，太原030001)
摘要： 目的研究大鼠皮肤肌肉特异性基因的表达，探讨引物的不同、退火温度变化与扩增产物特异性之间的关系。 方
法12只健康雄性Sprague-Dawley大鼠分为正常对照组与实验组(挫伤4h)。分别提取总RNA，反转录成eDNA，通过不同
引物、退火温度及反应体系进行PCR产物扩增，比较不同条件下差异条带的情况。结果总RNA量在2—4耀时，扩增条
dTl2NM和M13的随机引
带最亮；提高反转录温度有利于长片段eDNA的合成；使用T8KaRa公司带有17启动子的Oligo
物时，可最大限度地减少非特异性条带；先使用低严谨的退火温度，再使用高严谨的退火温度可显著地增强差异条带重复性
和敏感性。 结论差异显示技术方法简便、灵敏、高效，适用于一般性的基因差异表达研究。
关键词：差异显示技术；锚定引物； 随机引物；退火温度
中图分类号：Q789 文献标识码：A
Establishmentand ofmRNAdifferential-PCR
optimization
WANG
Xiao-wei，SUNJun-hong，jI Forensic
Xiao-yuan，DUQiu-xiang，WANGYing-yuan(DeptofPathology，Schoolof
Medical
Medicine，Shan．riUniversity，Taiyuan030001，China)
To skin-and to
study muscle-specific the beDareendifferent
Abslract：Objectize geneexpression，andexplorerelationship primers，
and inrats． MethodsTwelve male ratswere di．
annealingtemperaturesspecificamplification healthySprague-Dawley
randxrdy
videdintotwo contusion was PCR WaS
groups：controlgroup(F／=6)and RNAextracted，and
group(刀=6)．Total p划uetreversely
intoeDNA at
different different indifferentreaction Results
transeripted using primers annealingtemperatures system． Amplifi．
cationWSSthe whentotalRNAwas increaseofreverse for
highest 2—4越．The transcriptiontdIaperaturewasuseful eDNA
large
T7
fra
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