蛇床子总香豆素主要有效组份在人与大鼠肝微粒体中的代谢研究.pdfVIP

蛇床子总香豆素主要有效组份在人和大鼠肝微粒体中的代谢研究 杨媛 胡晓 南昌大学临床药理研究所，江西，南昌，330006 摘要：目的 本文研究蛇床子总香豆素主要有效组分欧前胡素(Imperatorin，Imp)、蛇床子素(Osthol，Ost)在 人和大鼠肝微粒体中的代谢特征；探讨参与Imp、Ost体外代谢的CYP450亚酶。方法 采用HPLC-UV检 测法测定大鼠和人肝微粒体温孵体系中Imp、Ost的含量;从温孵时间、肝微粒体浓度、底物浓度3个方 面考察Imp、Ost的体外代谢特征；探讨CYP2C8抑制剂甲氧苄氨嘧啶(TMP)、CYP2C9抑制剂磺胺苯 吡唑(Sul)、CYP2D6抑制剂奎尼丁(Qui)、CYP3A4抑制剂酮康唑(KET)、CYP1A2抑制剂α-萘黄酮(α-NF) 对Imp、Ost体外代谢的影响。结果 Imp、 Ost在大鼠和人肝微粒体中呈现酶促动力学代谢特征；α-NF，TMP 可显著抑制Imp在大鼠肝微粒体中的代谢；人肝微粒体中α-NF也可显著抑制Imp的代谢，同时Qui可抑制 低浓度的Imp以及TMP可抑制高浓度的Imp。KTE可显著抑制Ost在大鼠和人肝微粒体中的代谢，但同 时Qui和Sul对高浓度的Ost在人肝微粒体中的代谢有抑制作用。结论 CYP1A，CYP2C介导了Imp在大鼠 肝微粒体中的代谢;CYP1A2参与了Imp在人肝微粒体中的代谢，同时CYP2D6有可能参与了低浓度Imp 的代谢以及CYP2C8参与了高浓度Imp的代谢。CYP3A介导了Ost在大鼠和人肝微粒体中的代谢，同时 CYP2D6和CYP2C9也参与了高浓度的Ost在人肝微粒体中的代谢。 关键词：蛇床子素;欧前胡素；肝微粒体；细胞色素P450;药物代谢 疾病研究(上海)有限公司(微粒体蛋白含量，酶活性均已测定)。 肝微粒体温孵体系 NADPH再生反应体系包括：NADP0．5mol‘L～、G一6．PD 5．0mmol’L～、 2．Ol(u．L～、MgCl2 抑制实验分别选用2，10，50uM 制剂KET、CYPlA2抑制剂Q．NF与IIIlp，OSt同时加入肝微粒体蛋白中，其余操作同上。 Shhadzu ost，Imp浓度测定方法 LC-2010A，Di锄onsil 或Ost峰面积制备标准曲线，并计算Inlp或mp含量。 数据统计所有实验数据表示为Me鲫【土sD，数据用spssl2．0进行方差分析，并以统计图或表格的形式将结果 呈现。P0．05表示具有显著性差异。 结果： l 肝微粒体中ost，Imp的浓度测定方法的建立 内源性杂峰干扰，实验证实，，在肝微粒体温孵体系中加入各种药物均不干扰Imp和Ost的检测。表明本 方法具有较好的专一性。 一·’．辅霉豳自●1‘譬》7誓j‘”i‘’。。=。 ．●■E互团I。 ． 一……．。～一■■■■_■—●■啊——．…． 矗勇四曼碧圈 ——嘎暖■_ 。一 日 ■一I■■__■_一1______·___一 - …一 一一……～～ 一 ～～———■ 一r，一…一—● ‘． 一·一…………一，； 一 ．“，—■口口盘■■■ ·毒每=墨譬。10。童jl：i_ 的系列标准溶液。各取20耻l上述系列标准溶液分别加入200山无活性的肝微粒体孵育体系中，得到终浓度为 体样品，处理后，在上述的色谱条件下测定Ost的峰面积。以药物浓度x与峰面积比y进行回归，得标准曲线 孵体系项下操作处理后，20ul进样Ⅷ，LC分析，每一浓度制备并测定5个样品，3天连续制备并测定3个分析 批。计算其方法回收率及精密度，结果见表1。同样取oSt加入肝微粒体液中，使其终浓度为O．8、6．4、25．6uM， 样品按肝微粒体温孵体系项下操作处理后，20ul进样m，LC分析，每一浓度制