早老素双敲除小鼠神经退行性病变及复杂环境对其逆转作用的分子机理研究.docVIP

早老素双敲除小鼠神经退行性病变及复杂环境对其逆转作用的分子机理研究 【摘要】：老年痴呆(Alzheimer’sdisease，AD)是老年人中最普遍的一种以脑内Aβ水平显著升高为特征的中枢神经系统退行性疾病，早老素基因(Presenilin，PS)在AD病理学中起重要作用，揭示其生理功能对阐明AD的具体分子机制具有重要意义。早老素是跨膜的天冬氨酸蛋白酶，有PS1和PS2两种形式，基因敲除研究表明，条件性PS1和PS2双敲除(PSconditionalknockout，cDKO)小鼠表现出类似AD的进行性的神经退行性病理变化，包括认知能力衰退和前脑退化等，但是这些病理症状不依赖于脑内Aβ水平，其确切的分子机理还未阐明。本研究采用基因芯片和定量PCR技术分别考察3月龄和10月龄cDKO小鼠皮层和海马内发生的基因表达变化，分析差异表达基因和相关的信号通路，初步探讨cDKO小鼠发生退行性病变的分子机理。复杂环境处理(Environmentalenrichment，EE)是把动物以更大的群体放在一个更大的、放有多种玩具的笼子或其他饲养环境里，使动物有更大的机会进行复杂的社会性交流和探索的一种处理方式。EE已被证实能改善多种正常和认知能力缺陷动物的学习记忆能力，诱导动物脑部的形态学变化，还对许多神经退行性疾病及其他病理过程具有良好的延缓和逆转作用。为了考察EE是否能减轻cDKO小鼠的记忆缺陷和前脑退化，本实验对1月龄的cDKO小鼠进行5个月的每天3小时的复杂环境暴露，然后进行行为学和组织学检测，以考察EE诱导的变化。接着运用高密度基因芯片技术、荧光实时定量PCR技术、免疫组化以及Westernblotting等分子生物学技术考察EE引起的基因表达变化，初步探讨EE对cDKO小鼠的生理效果的分子机理，同时为开发AD的治疗方案提供一些理论基础。1．PS1／PS2条件性双敲除小鼠神经退行性早期基因表达谱分析运用基因芯片技术考察了cDKO小鼠3月龄时皮层和海马基因表达的变化，分别鉴别到56和46个基因的表达发生了改变。用定量PCR技术检测了一些重要基因的表达，其结果与芯片结果相符。功能分析揭示，这些差异表达基因主要可以归入免疫和炎症、代谢、细胞黏附、信号转导、结构蛋白和肿瘤相关基因等几类。其中，免疫炎症相关的基因包括补体成员和Cathepsin家族蛋白酶的表达显著上调。此外，突触后受体AMPA受体亚基GluR1和GABA受体α亚基Gabra2及蛋白激酶Mapk8等都与AD神经病理学有关，它们的基因在cDKO小鼠海马内表【关键词】：早老素神经退行性基因表达复杂环境处理海马依赖的记忆前脑退化免疫炎症反应 【学位授予单位】：华东师范大学 【学位级别】：博士 【学位授予年份】：2006 【分类号】：R741 【目录】：摘要8-11Abstract11-15第一章PS1／PS2条件性双敲除小鼠基因表达谱分析15-73摘要15-16前言16-19第一节PS1／PS2条件性双敲除小鼠神经退行性早期基因表达谱分析19-39材料和方法19-25结果25-291.组织总RNA和cRNA质量的检测252.神经退行性早期cDKO小鼠皮层基因表达谱25-273.定量PCR检测神经退行性早期cDKO小鼠皮层的基因表达274.神经退行性早期cDKO小鼠海马基因表达谱27-285.定量PCR检测神经退行性早期cDKO小鼠海马的基因表达28-29讨论29-321.神经退行性早期cDKO小鼠皮层和海马中免疫和炎症系统异常激活29-302.cDKO小鼠皮层和海马其他相关基因表达变化30-32版图与说明32-39第二节PS1／PS2条件性双敲除小鼠神经退行性晚期基因表达谱分析39-73材料和方法39-40结果40-591.组织总RNA质量检测402.神经退行性晚期cDKO小鼠皮层基因表达谱40-493.定量PCR检测神经退行性晚期cDKO小鼠皮层基因表达变化49-504.神经退行性晚期cDKO小鼠海马基因表达谱50-585.定量PCR检测神经退行性晚期cDKO小鼠海马基因表达变化58-59讨论59-631.cDKO小鼠神经退行性晚期皮层和海马中免疫和炎症系统进一步激活59-602.神经退行性晚期的cDKO小鼠皮层和海马中其他基因表达变化60-63版图与说明63-73第二章复杂环境处理部分逆转cDKO小鼠神经退行性表型73-86摘要73前言73-74材料和方法74-76结果76-781.EE对cDKO小鼠运动能力和海马依赖的记忆能力的影响76-772.EE对cDKO小鼠前脑形态学的影响77-78讨论78-801.复杂环境处理增强cDKO小鼠海马依赖的学习记忆能力782.复杂环境处理能部分逆转cDKO小鼠前脑的形态学改变78-80版图与说明80-86第三章复杂环境处理的逆转作用的分子机理初