压电免疫传感器用于黄曲霉毒素B1检测研究的论文.pdfVIP

第十届全国化学传感器学术会议论文摘要集 B生物传感器 B17压电免疫传感器用于黄曲霉毒素B1检测研究 晋晓勇k。，金雪芳‘，蒋健晖‘，沈国励h‘，俞汝勤。 (‘湖南大学化学4艺．z-学院，化学生物传感与计量学国家重点实验宣，长沙410082 。宁夏大学化学化工学院，银川750021) 摘要：本文基于竞争免疫反应和纳米金放大技术提出了一种用于黄曲霉毒素Bl(AFB-)检测的压电免疫传 感器，该传感器通过探针表面修饰抗原与待测抗原对鼠抗AFB．的竞争结合，得到一个和目标物AFB，含量成负相关 的压电晶振频率变化值，然后进一步利用纳米金标记的羊抗鼠IgG对变化信号放大，从而大大提高了传感器的灵 敏度，实现了利用压电对小分子目标物在低浓度水平的检测． 染的食物被认为是导致肝癌、胃癌、肠癌等疾病的主要原因，也能诱发肾癌、乳腺癌及卵巢癌等 染、操作繁冗、灵敏度不佳、仪器昂贵或者易出现假阳性结果等缺陷，因此开发快速灵敏、简单 廉价的用于AFBl检测的方法非常需要。本文采用竞争免疫反应和纳米金放大技术研制了一种压 电免疫传感器用于AFBl检测，是一种快速简便并且能够多次重复使用的新型压电免疫传感器。 1 实验部分 1．1试剂与仪器 验装备厂)。 方法及原理 mM raM 并于4C过夜自组装，然后用2EDC和5 NHS(各3091)活化其表面的羧基。随后在 h。经PBS和水冲洗后， 晶振表面滴加301．tl浓度为101．tg／ml的AFBl．BSA溶液，37℃下温育1 封闭。如此处理好的探针保存备用或直接用于AFBl的检测。 竞争免疫友．应?先在检测池中加入40I．tlPBS，再加入含不同浓度的AFBl的待测样品30山， 40山金标二抗放大信号，室温放置45min。实验过程中传感器频率变化由石英晶体分析仪及联机 计算机实时记录。 水冲洗后重复进行AFBl的分析检测，反复多次考察其再生能力。 2．结果与讨论 2．1探针表面结合AFBl．BSA最佳用量 AFBl一BSA偶联抗原固定量的多少，直接影响传感器表面结合一抗以及金标二抗的量，从而 影响传感器的响应范围和灵敏度。经考察发现，最佳偶联抗原用量为301xl(1099／m1)，数据略。 2．2鼠抗AFBl最佳滴度和金标二抗最佳用量 36 第十届全国化学传感器学术会议论文摘要集 B生物传感器 使用制备好的探针在被检测物AFBl空白条件下，对不同滴度鼠抗AFBl响应结果进行了考 察，得出一抗最佳滴度为1：8000(见图I)。同理得出最佳金标二抗用量为：浓缩四倍的纳米金 标记羊抗鼠IgG，体积为409l。具体数值见图2。 图1：不同滴度鼠抗AFB，对探针频 图2：金标二抗最佳用量优化 图3：压电免疫传感器对AFB． 率变化的影响 检测的工作曲线 2．3对AFBl测试结果 传感器与待检测的AFB，竞争免疫反应结合一抗以及金标二抗，工作曲线如图3所示。由图 可见，随着待测液中AFB-的浓度增大，由于竞争作用，使得结合到探针表面的鼠抗AFB。减少， 导致结合的金标二抗减少，使压电传感器频率变化幅度大大减小，从而实现了放大检测信号分析 测下线为0．01ng／ml。 2．4再生效果 检测池中加入甘氨酸一盐酸缓冲液(pill．7)放置15分钟，然后分别用PBS和水冲洗，晾干 后保存或继续用于AFBl分析检测。经反复再生，该传感器可重复使用至少7次。 参考文献s C B 【1】JaimezJ，Fente I．Journalof A。2000，882：1-10 A，Vazquez Chromatography S NJ Chimica 【2】GardenR，Strachan