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微生物实验考题 显微镜分辨率的提高办法 （显微镜的分辨率是指：能辨别两点之间的最小距离的能力；其中，最小可分辨距离越小，显微镜的分辨率越高。） 其受光的干涉现象和所用物镜性能的限制： 最小可分辨距离 （λ为光源波长，NA为物镜的数值孔径值） 一方面：减小入射光的波长，不能超出可见光范围，因此越靠近紫光越好， 但考虑到人眼对光的反应，采用黄色光为佳，所以实际上不考虑改变波长大小。 另一方面：提高数值孔径值。 因为 NA=n·sinθ （n为玻片和物镜间介质的折射率，θ为物镜的镜口角的半数） 而θ又取决于物镜的直径和工作距离。所以可以通过增加介质折射率（如：滴加松油）和镜口角（如：适当减小物镜直径和工作距离）来增加NA值，从而减小d值，提高分辨率。 1-2血球计数板的使用对象 可用于各种微生物单细胞（孢子）悬液的计数。 血球计数板较厚，不能使用油镜，因此常用于个体相对较大的酵母细胞、霉菌孢子等的计数。 可用于计数不具有鞭毛等运动结构或运动性弱的菌体。 1ml菌液中的总菌数=*25*104*B （A为5个中方格中的总菌数 B菌液稀释倍数） 1-3微生物大小的原理 微生物细胞大小，是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小，只能在显微镜下测量。用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同，因此，目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小，在使用前必须用镜台测微尺进行校正，以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值，然后才可用来测量微生物的大小。 目镜测微尺每格长度（ μm）=（镜台测微尺格数×10）/目镜测微尺格数 2-1.革兰氏染色法的步骤顺序；常见革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有哪些 染色 　　（1）初染 加草酸铵结晶紫，约一分钟，水洗。 　　（2）媒染 滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。 （395％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒钟，立即用水冲净酒精。 （4）复染 用番红液染1—2分钟，水洗。 革兰氏阳性菌（紫色）：金黄色葡萄球菌 革兰氏阴性菌（红色）：大肠杆菌 2-2.微生物的特殊结构有哪些 芽孢（孔雀绿+番红—枯草芽孢杆菌）、荚膜（黑色素溶液—圆褐固氮菌）、鞭毛（硝酸银+Leifson氏鞭毛染液--普通变形菌） 放线菌：孢子丝、孢子、气生菌丝、基内菌丝（吕氏碱性美蓝染液+高氏1号培养基） 3-1.培养基的类型判断和成分判断 根据微生物种类和实验目的不同，培养基又可以分成不同的类型。 按成分不同：天然培养基、合成培养基、半合成培养基。 按培养基物理性质不同：固体培养基、半固体培养基、液体培养基。 按其用途不同：基础培养基、鉴别培养基、选择培养基 成分一般包含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子。 3-2 .培养基的灭菌温度与对象 干热灭菌所需温度高：160~170oC 高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）：高于100 oC（约121 oC） 灭菌是指杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子。 3-3.湿热杀菌比干热好的原因 其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在---潜热能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。 4-1.微生物数量的计算 应用平板菌落计数法：平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。 每毫升中总活菌数=同一稀释度三次重复的菌落平均数×稀释倍数×5 （之所以乘以5，是因为每个培养基中倒有0.2ml的菌液，通过乘5达到每毫升的要求） 4-2.外界因素对微生物的影响 化学消毒剂主要有重金属及其盐类，酚、醇、醛等有机化合物以及碘、表面活性剂等。它们的杀菌或抑菌作用主要是使菌体蛋白质变性，或者与酶的—SH基结合而使酶失去活性所致。 5-1.甜酒酿的甜度 米饭中的淀粉在酒曲中的糖化酶的作用下先转化成麦芽糖，接着在酒曲中的麦芽糖酵素的作用下，分解成葡萄糖。之后，葡萄糖又酒曲中酒化酶的作用下，转化成酒精（乙醇）及二氧化碳。当发酵过程还处在分解出大量葡萄糖时，酒酿的甜度最高，接着发酵的话酒精含量会逐渐增大，同时甜度也会逐渐减低 因此，甜酒酿的甜度和有氧发酵阶段和无氧发酵阶段的时间有关。 5-2.酸乳的发酵类型 厌氧型. 乳酸菌绝大多数都是厌氧