Cu-%272%2b-对罗氏沼虾几种同工酶影响.pdf

论文题目：Cu2+对罗氏沼虾几种同工酶的影响 学科专业：动物学 学位申请人：俞亚东 指导教师：许燕副教授 摘 要 罗氏沼虾(MaorobrachJum rosenbergYi)，因肉多味美、营养价值高等优点， 受到人们的欢迎，其养殖规模日益扩大。然而随着工业废水和生活污水排入江河 湖海，特别是在养殖中频繁使用硫酸铜清塘灭藻，使得养殖水体中cu2+含量迅速增 加，给罗氏沼虾的养殖带来了潜在的威胁。铜是甲壳动物重要的营养元素，对多 种生长发育相关的生物酶的组成和功能有着重要作用，但是过量的Cu2+会对虾体产 生毒害。2003年度的《中国渔业生态环境状况公报》指出，以Cu2+浓度不超过 0．Olmg／L为标准，但局部水域污染超标程度却在增加，如杭州湾、舟山近海和长 江口均高达0．07mg／L。因此，研究Cu2+对罗氏沼虾的影响不仅对深入了解其生理 机制具有重要意义，而且对甲壳动物的健康养殖具有重要的参考价值。同工酶作 为一种生化指标，已广泛应用于物种及杂种鉴定、基因表达与调控等研究中。虽 然已有很多报道研究重金属对甲壳动物的毒性作用，但Cu2+污染对罗氏沼虾同工酶 影响的报道尚不多见。在本研究中，我们采用生态学单因子梯度试验方法，选取 与局部受污染水域中接近的Cu2+浓度(0．08mg／L)，并参考相关文献与亚急性毒性 5．12 实验的要求，配成O．01mg／L、0．08mg／L、0．64mg／L、 mg／L浓度梯度。 饲养受试虾一周后，从酶活力、同工酶电泳酶谱和酶细胞化学定位电镜观察三个 角度探讨Cu2+对罗氏沼虾复眼、鳃、肝胰腺、心脏和肌肉五种组织内几种同工酶(酯 性磷酸酶(ACP))影响，以期了解Cu2+对罗氏沼虾生理生化的影响，为健康养殖罗 氏沼虾提供参考意见。 1．Cu2+对罗氏沼虾五种组织中EST、POD、SOI)酶活力的影响 本文利用分光光度法测定不同浓度Cu2+饲养罗氏沼虾一周后，其五种组织中 EST、POD、SOD的酶活力变化，并对实验数据用SPSS软件分析差异显著性，结果 如下： EST活力变化情况：复眼、肌肉和心脏中EST活力弱且变化差异性不显著，鳃 上成先上升后下降趋势，在Cu舢为0．Olmg／L时酶活力达到最大，除在Cup为 0．64mg／L时略有上升外，其余均成下降趋势，各Cu2+处理组均与对照组有显著差 异(尺O．05)。 POD活力变化情况：复眼、肌肉和心脏中POD活力弱且变化差异性相对不显著， 时略有上升后继续下降，各Cu2+处理组与对照组有显著差异(尺O．05)。 SOD活力变化情况：低浓度Cu2+导致五种组织中SOD活力均明显增加，复眼和 SOD活力的均明显下降，其中鳃、肝胰腺和心脏中SOD活力变化与对照组差异性较 为显著。 总之随着Cu2+浓度的增加，EST、POD和SOD活力总体上是先上升，后下降， 有一定的剂量一一效应关系，在鳃和肝胰腺中尤为明显，因而可以考虑分析这两种 组织中几种酶活力的变化来了解Cu2+对虾体的胁迫程度。 2．cu2+对罗氏沼虾五中组织中BST、POD、SOD同工酶酶谱的影响 本文采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳技术以及同工酶染色技术，对饲养后 虾体五种组织中EST、POD、SOD进行电泳酶谱分析，发现三种同工酶在五种组织 中的分布和表达具有明显的组织特异性。结果如下： EST酶谱变化情况：EST在肝胰腺和鳃中表达较强，酶带数较多，五种组织中 均没有发现酶带缺失或新增现象。随着Cu2+浓度的增加，复眼、心脏和肌肉中酶带 没有发现显著变化；鳃中的六条酶带成规律性变化，颜色均先加深，在Cu2+为 色深浅无明显变化。 POD酶谱变化情况：复眼、心脏和肌肉中POD酶带数少，且随着Cu2+浓度的增 加，酶带没有发现显著变化。鳃中酶带颜色宽度先加深变宽，在0．64mg／L时达到 最深最宽，随后酶带色变淡且变窄；肝胰腺中POD表达较强，共有2条酶带 酶带变深变宽，在Cu2+为0．64mg／L时达到最深最宽，而后变浅变窄。 SOD酶谱变化情况：复眼、心脏和肌肉中SOD酶带数少且随着Cu2+浓度的增加， Ⅱ 达到最宽，随后略有变窄，前一酶带颜色没有显著变化，后一酶带颜色逐步加深， 随后消失。