禽传染性支气管炎病毒S1、M、N基因真核表达质粒的构建与免疫原性研究.pdfVIP

家禽传染痫 因时，可以获得与天然蛋白大小相似的完全糖基化产物。(2)毕赤酵母对各种外源基因的表达能力不同。 黄亚东等Il”利用毕赤酵母中表达出的IBVH株的sl蛋白没有被完全糖基化，而且表达产物没有被分泌到 培养基上清中，还存在于酵母细胞内。陈定虎等116I利用毕赤酵母表达美洲商陆抗病毒蛋白时表达产物过量 糖基化，所表达的蛋白比实际的要大。虽然许多蛋白质在毕赤酵母中可高效表达，如明胶表达量高达 性支气管炎s1基因在毕赤酵母表达系统中进行分泌表达，为制备IBV诊断抗原、基因工程疫苗提供了基 础材料．并为禽传染性支气管炎的其他功能性抗原基困在此系统中的表达，研制禽传染性支气管炎病诊断 试剂盒及基因工程疫苗奠定了基础。 参考文献略 禽传染性支气管炎病毒S1、M、N基因真核表达质粒的构建及免疫原 性研究 王红宁，周生，黄勇，柳萍，陈萍．李晓英，唐梦君，潘盛，白天 四川农业大学动物科技学院动物预防医学生物工程实验室 摘要： 本研究成功构建了禽传染性支气管炎病毒中国肾型分离株s1、M、N基因的真核表达质粒， S1、M、 并将真核表达质粒经肌肉注射途径免疫雏鸡，免疫后用间接ELlSA检测特异性抗体．结果表明IBV N基因真核表达质粒单独或混台免疫均可诱导鸡特异性抗体产生。s1、M、N三基因质粒混合免疫比单基因 质粒的免疫效果好，三基因质粒混合免疫攻毒保护率高于单基因质粒免疫。 关键词： 禽传染性支气管炎病毒；真核表达质粒；间接ELISA检测；免疫原性 Infectious 禽传染性支气管炎(Avian 为病鸡出现呼吸道症状、肾脏病变及产蛋数量和品质下降等。该病在全世界广泛发生，是严重危害世界养 禽业的重大传染病之一。禽传染性支气管炎病毒(IBV)是冠状病毒科冠状病毒属的代表种，目前世界上 在着很大差异，不同血清型毒株之间交叉保护力弱。单一毒株弱毒疫苗常有免疫失败，多价灭活疫苗免疫 效果较好，但用量大，成本较高，进一步研究安全、高效的DNA疫苗用于该病预防具有重要意义。 IBV属于单股正链的RNA病毒，基囚组全长27．6kb，主要编码三种结构蛋白：纤突蛋白(S)、膜蛋白 抑制抗体，为IBV的主要免疫原。N蛋白携带着T细胞表位，在免疫和保护上发挥作用。有报道M蛋自上存 在着具有重要免疫作用的抗原决定簇，能诱导细胞介导的免疫反应p1。本研究将IBV中国分离株主要结构 N基因真核表达质粒，进行了特异性抗体检测和攻毒保护实验，为IBVDNA疫苗的研制提供了科学依据。 1材料 学动物预防医学与生物工程实验室分离鉴定并保存。IBV弱毒疫苗购自中牧。 1．2工具酶及试剂 限制性内切酶HindIII、XhoI，T4DNA连接酶、ExDNA聚合酶、DL2000 Taq 第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 司。胶回收试剂盒、质粒提纯试剂盒购自北京赛百盛基因公司。其他试剂均为分析纯。 2方法 2．1引物的设计及台成 I酶切 上游引物设计在起始密码子处，并加上Hind111酶切位点；下游引物设计在基因末端，并加上Xho 位点。引物序列分别为： ESI：GGGAAGCTTGrL、1vrGATTAGAGATGTTGG Es2：gTTCTCgAgTTAACTAACATAAgggCAACr瞻 EMl：GTCAAGCrⅣJTITCAAOATGTCCAACG EM2=CTCCTCgAgCTCTACACACACACATTTATg ENl：CTGAAGCTTAl℃ATGGCAAGCAGTAAGGCA EN2：CTCCTCgAgTTAgAgTTCATIqTCACCAAg ’2．2 52C 脂糖凝胶电泳观察。 ， 2．3s1、M、N三基因真核表达质粒的构建及