结核分支杆菌特异的PE%2fPPE蛋白应用于结核病血清学诊断的初步的研究.pdfVIP

复旦大学博士毕业论文 中文摘要 摘要 结核病是一种主要的呼吸系统传染病。早期诊断以及规范的多药物联合的化 学治疗是主要的控制策略。改良的诊断试剂对于检测结核分支杆菌感染是必须 的，研究新的血清学诊断方法是对现有诊断方法的一个有力补充。 最近已经证明由结核分支杆菌RDl(一个9．5一Kb的DNA片段)区基因编码 的蛋白在细菌毒力、疫苗发展和诊断试剂设计等方面具有重要作用。比较基因组 学和生物信息学表明除了RDl，还有11个基因组区域在彪f曲e邝以∞拈中保守 108 存在，而在BCG疫苗株中是缺失的。这些缺失区包括了彪t功8彤“硝sH37Rv 个0RFs，在目前世界不同地区用作抗结核疫苗的所有13个BcG疫苗亚株中都是 缺失的。最近已经有不少研究证明，RDl区和其他的RD区编码的蛋白具有发展 成为疫苗和诊断试剂的潜力。彪tU6e形￡，，叩妇基因组中大约有1096的oRFs编码 了PE和PPE家族蛋白，它们是富含甘氨酸且膨}曲B比以∞如特有的蛋白，由于 PE／PPE家族蛋白在序列和可能结构上的独特性，推测它们有可能具有比较重要 的免疫学意义，这方面的研究目前还不是太多。不过，现在已经有了一些关于在 临床方面定性定量研究PE／PPE蛋白的免疫反应的报道。 本项研究的目的是为了确认新的结核病血清学诊断抗原，我们拟对在 膨}曲8删，∞如中保守存在，而在BcG中缺失的PE／PPE家族成员一Rv3425， 估，并且将它们与人们熟知的两个抗原，ESAT一6和CFP_10相比较。以体外培养 在体外指数生长期表达的功能活跃的基因。我们成功地在￡c“j中克隆表达纯 检测针对结核病人血清以及接种BCG的健康对照者(n=28)血清的抗体反应。结 核病人血清包括肺结核病人的血清(n=50)和肺外结核病人的血清(n=32)。 cFP_lO，EsAT一6在识别结核病人和健康对照者血清中IgG抗体的反应。五种抗 和36．o％，检测肺外结核病人中的血清IgG反应的敏感性分别为59．4％，18．8％， 12．5％，65．6％和34．4％，与接种过BcG疫苗的健康对照者相比较，五种抗原检测 结核病人的特异性分别为100％，96．4％，96．4％，96．4％和100％。可以看出，虽然 五种抗原的特异性均比较高，可是在检测结核病人的敏感性方面，也只有重组 复旦大学博士毕业论文 中文摘要 和EsAT一6的血清学检测结果合并在一起考虑，检测肺结核和肺外结核病人的敏 感性分别可以上升到82％和68．8％，特异性为96．4％。 结核和肺外结核病人的敏感性分别为32．0％，74．096，78．096和29．o％，64．5％， 61．3％，特异性分别为100％，96．4％，96．4％。如果将三个抗原的检测结果合并在 一起考虑，检测肺结核和肺外结核病人的敏感性分别可以上升到88％和68．8％， 特异性为96．4％。 的健康对照者和结核病人的血清学反应具有显著的差异(p0．0001)，而且我们 还发现重组Rv3425蛋白抗IgG的抗体反应强度基本上同cFP一10等同，并且高于 ESAT一6。证明了彪t曲e邝以Ds妇Rv3425具有免疫敏感性和免疫特异性的本质， 有希望用于结核病人的血清学诊断，这在以前是没有报道过的． 总之，利用现有的血清学诊断测试检测出所有结核病人血清中抗原物质的所 有抗体是不可能的，但是合并这些单独的抗原将会增加血清学诊断的作用。 关键词：结核分支杆菌血清学检测诊断抗原缺失区PE／PPE家族蛋白 2