生物物质分离工程（ 第二版） 教学课件 作者 严希康 主编 第2章提取分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存.ppt

尚辅网 尚辅网 尚辅网 * 天然蛋白质分子外部的基团，如果不带电的话，基本上是高度极性的。蛋白质结构的某些稳定性，由于这些极性基团和溶剂接触而升高了，所以表面基团性质的改变，会对蛋白质稳定性有着重要的影响。 2.4.2 基团的化学修饰对三维结构的维系 尚辅网 * 在有些情况下，光亮度，特别是太阳光，由于光氧化危险的存在，所以必须避免。强的紫外光和任何离子辐射也会引起键的断裂并使活性丧失。对许多蛋白质来说，为了防止硫羟基的氧化和降低光氧化的危险，除去空气至关重要。 2.5 对策 尚辅网 * Thank you * * * * * 尚辅网 蛋白质的三维结构 2 蛋白质的失活 3 前言 1 2 提取、分离和精制过程中蛋白质活性的稳定性和保存 共价过程中导致的失活 4 对策 5 尚辅网 尚辅网 * 2.1 前言 长期以来，具有生物活性形式的蛋白质的分离被认为是一项极其困难的工作。得到的最终产品是否纯，并且仍保留有活性，常带有偶然性，因此蛋白质的分离显得相当神秘，特别是伴随它们显著的生物活性所产生的十分复杂的反应过程，在还不了解的情况下（酶看起来是非常有效和选择性的催化剂，其他蛋白质，像激素具有强有力和重要的生理性）。 尚辅网 2.2 蛋白质的三维结构 1 2 蛋白质的组织层次 三级结构 3 四级结构 4 5 相关的蛋白质 侧链基团和二级结构 尚辅网 * 2.2.1 蛋白质的组织层次 （１）氨基酸单位 （２）氨基酸残基的构型 （３）肽键 （４）螺旋和折叠构象　 （５）转角 （６）超二级结构 尚辅网 2.2.1 蛋白质的组织层次 尚辅网 2.2.1 蛋白质的组织层次 尚辅网 2.2.1 蛋白质的组织层次 尚辅网 2.2.1 蛋白质的组织层次 尚辅网 2.2.1 蛋白质的组织层次 尚辅网 2.2.1 蛋白质的组织层次 尚辅网 2.2.1 蛋白质的组织层次 尚辅网 2.2.1 蛋白质的组织层次 尚辅网 （１）二硫键 （２）侧链基团的相互作用和蛋白质折叠 （３）非极性和极性侧链 （４）芳香族之间的相互作用 （５）氢键　 （６）结构域 2.2.2 　三级结构 尚辅网 * 2.2.2 　三级结构 尚辅网 * 2.2.3 四级结构 尚辅网 * 在蛋白质内部疏水性残基聚集的空间内，原子的排列是十分紧密的，当一个残基置换，伴有能保持内部紧密排列的另外的置换时，则突变的蛋白质就能得到。同样地，酪氨酸置换苯丙氨酸等也是十分常见的保持芳香族芳香族侧链基团的相互作用，有助于蛋白质结。 2.2.4 相关的蛋白质 尚辅网 * 2.2.5 侧链基团和二级结构 尚辅网 * 2.3 蛋白质的失活 1 2 折叠与伸展 活性的可逆丧失 3 4 蛋白质的稳定 热稳定蛋白质 尚辅网 * 从天然活性状态伸展成较随机（无活性）的状态时，有些蛋白质遵循简单的一级动力学过程，而有些蛋白质则包含着１个或多个相互独立、相对稳定的中间构象状态。 2.3.1 折叠与伸展 尚辅网 * 2.3.2 活性的可逆丧失 最常见的是温度升高引起的热变性，使得蛋白活性丧失，尤其是酶。如果没有有害的共价过程发生，理论上讲这种热失活是可逆的，但实际上它常常是不可逆的，除非使用特殊条件，比如通过多点吸附作用来固定化，因此在分离和使用时都要避免高温。通常酶在０～４℃时最稳定。 尚辅网 * 增强蛋白质稳定性的最重要方法之一是固定化，尤其是共价多点结合。将天然构型蛋白质表面的众多基团与刚性支撑物共价结合，可显著降低蛋白质伸展和失活的概率。这种方法常常使用，尤其对酶。实际上共价多点结合固定的蛋白质可用加热方法使其完全失活，但随后重新折叠，并获得活性。 2.3.3 蛋白质的稳定 尚辅网 * 1.高温（例如高于50-60℃）易于引起大多数蛋白质的热变性。 2.可通过基因工程技术引入单一位点的突变来提高蛋白质的稳定性：①引入更多的内部或表面的二硫键；②增加内部氢键的数目；③改善内部疏水堆砌；④增加表面离子键；⑤增加金属结合位点数目。 2.3.4 热稳定蛋白质 尚辅网 * 2.4 共价过程中导致的失活 1 2 活性中心上必需基团的反应 基团的化学修饰对三维结构的维系 尚辅网 * 2.4.1 活性中心上必需基团的反应 （１）氧化剂 （２）酰化剂 （３）烷化剂 （４）芳香环上的替代 尚辅网 * 2.4.1 活性中心上必需基团的反应 （１）氧化剂 （２）酰化剂 （３）烷化剂 （４）芳香环上的替代 * * * * * * * * *