慢性乙型肝炎患者外周血CD8%2b%2fCD28%2b淋巴细胞及其亚型的研究.pdfVIP

+ + 慢性乙型肝炎患者外周血CD8 /CD28 淋巴细胞及其亚型的研究 汤佳良 周建康 沈华江 许文芳 吴勇 吴新娟 陈雪芳 浙江省绍兴市第六人民医院（312000） 乙型肝炎病毒（HBV ）是一种非细胞毒性病毒，当其进入机体后常可引起一系列复杂的免疫反 应．而机体产生的免疫应答的强弱又与HBV感染所致的不同临床结果，例如急性肝炎恢复、慢性病 毒携带以及慢性肝炎等密切相关。在这一系列免疫应答中，细胞免疫应答又是决定HBV感染机体后 转归的最重要因素。不同的T淋巴细胞亚群对病毒抗原的反应状态也不同，即对临床过程的轻重及转 归的影响不同。本文通过对慢性乙型肝炎患者外周血CD8+ + /CD28 淋巴细胞及其亚型分析，以探讨其 与慢性乙型肝炎患者的临床状态以及HBV复制的关系。 对象与方法 一、研究对象：选取2005.2～2006.4 在浙江省绍兴市第六人民医院就诊的乙型肝炎患者308 例； 男207 例，女101 例，年龄16 至63 岁。诊断按照2005 年中华医学会肝病学分会、感染病学分会《慢 性乙型肝炎防治指南》，分慢性乙型肝炎280 例，其中HBeAg 阳性慢性乙型肝炎138 例，HBeAg 阴 性慢性乙型肝炎142 例；慢性乙肝病毒携带者28 例。 另选取22 例健康体检人群，无肝炎病史，乙型肝炎标志物测定均阴性，血清转氨酶和黄疸指数 均正常，年龄19 至42 岁，男13 例，女9 例。 二、外周血淋巴细胞表面 CD 分子测定：采用流式细胞技术测定外周血淋巴细胞表面标志，所 用试剂为 CD8-PC5 ，CD28-FITC ，CD45RA-PE ，CD45RO-PE ，IgG -FITC ，IgG -PE ，均购自美国 1 1 Beckman-Coulter 公司。 取1ml 静脉血，以EDTA 抗凝，混匀后，各吸100µl 全血于3 支测定管中，第1 管加入IgG1-FITC， IgG1-PE 和CD8-PC5 ；第2 管加入CD28-FITC ，CD45RA-PE 和CD8-PC5 ；第3 管加入CD28-FITC ， CD45RO-PE 和 CD8-PC5 ，每测定管每种单克隆抗体量均为20µl 。试剂和抗凝血混匀后，在室温、 避光条件下作用20 分钟后，利用Beckman-Coulter 的快速标本制备仪溶解红细胞和血小板，在流式 细胞仪上测定。所用仪器为Beckman-Coulter Epics XL 流式细胞仪。 上机测定时，利用侧向散射光 SS 和前向散射光FS ，选取淋巴细胞群，再以CD8+ 淋巴细胞设 门（二级设门）。选取CD8+ 淋巴细胞群，以IgG -FITC/IgG -PE/CD8-PC5 为同型对照，测定CD8+ 淋 1 1 巴细胞上CD28、CD45RA、CD45RO、CD28/CD45RA、CD28/CD45AO 的表达。 三、乙型肝炎标志物的测定：采用酶联免疫吸附试验（ELISA ）。试剂为中山达安生物技术有限 公司免疫试剂盒，操作按试剂盒说明书。 四、乙肝患者血清中HBV 病毒载量的测定：采用实时荧光定量PCR 法，试剂为中山达安生物 技术有限公司的HBV 核酸扩增荧光定量检测试剂盒，荧光定量PCR 仪为美国ABI 7000 型。操作按 试剂盒说明书。 212 五、统计学分析：应用统计学分析软件 SPSS13.0 对检测结果进行方差分析，以均数±标准差 （x ±s ）表示实验结果，t 检验分析各组间差异。 结 果 + 一、慢性乙型肝炎患者外周血CD8 淋巴细胞CD28 的表达 与正常健康对照比较，慢性乙型肝炎患者外周血CD8