基因芯片技术筛选不同发育阶段人表皮干细胞差异表达基因的研究.pdfVIP

分议论文桑 ·207· CSF组(P=0．002)；3个实验组侧支血管数均多于对照组(P0．05)。 5、VEGF阳性表达的血管数 VEGF抗体S-P二步法免疫组化法染色的切片，在光学显微镜下观察，血管内皮细胞胞浆染色呈棕 黄色者为阳性细胞，该毛细血管即为VEGF阳性表达的血管。每一标本随机选取5个视野，在400倍显 微镜下观察计数VEGF阳性表达的血管数，由两人独立分别计数染色之微血管数目，其平均值即为 胞浆黄染的毛细血管；G—CSF组也可见不少胞浆黄染的毛细血管；对照组可见稀疏胞浆黄染的毛细血 0．05)。 结论 1、在兔缺血后肢肌肉内多次注射莺组人碱性成纤维细胞生长因f(rh．bFGF)，方法简单易行，安全 可靠，可促进血管新生，增加缺血后肢血液灌注，改善肢体缺血状态； 2、单纯皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG—CSF)可促使兔骨髓干细胞动员，可促进兔缺血后 肢的血管新生，增加侧支循环，改善肢体缺血状态； 3、通过皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG．CSF)促使兔骨髓干细胞动员；在兔骨髓干细胞动 员促使”干细胞自我移植”的基础上，兔缺血后肢肌内多次注射重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh— bFGF)，可共同促进缺血组织内血管新生，建立更丰富的侧支循环，使组织缺血得到更充分的改善，效果 优于单独应用bFGF蛋白或骨髓于细胞动员。 通讯作者：党晓卫Email：dangxwl001@163．cⅧ 基因芯片技术筛选不同发育阶段人表皮干细胞 差异表达基因的研究 蓝蔚1一，刘德伍H，毛远桂1 1．南昌大学第一附属医院烧伤研究所，江西省南昌市330006 2．浙江省温岭市第一人民医院烧伤整形科，浙江省温岭市317500 【摘要】目的：利用基因芯片技术筛选不同发育阶段人表皮干细胞差异表达基因，分析不同发育阶段 人表皮干细胞基因表达变化的特征及其可能的生物学意义，为进一步探讨表皮干细胞增殖分化调控机 制提供新思路和线索。方法：收集28～32周胎儿，4～12周岁少儿、35～55岁成年人3组正常人皮肤标 本，采用胰蛋白酶和EDTA联合消化法分离表皮，Ⅳ型胶原快速粘附法分离、纯化人表皮干细胞，免疫 DNA用点样仪点制在一张经过 细胞化学染色法分别行13，整合素、K19单抗检测鉴定。将21522条Oligo 化学修饰的载玻片上制备成表达谱芯片。按Trizol一步法分别提取各组细胞总RNA，琼脂糖甲醛变性 Cy5荧光标记到实验组(胎儿组、少儿组与成人组)cDNA上，制成探针，并与表达谱芯片进行杂交及扫描 芯片荧光信号图像。采用LuxScan3．0图像分析软件对芯片图像进行分析，把图像信号转化为数字信 time RT-PCR技 号。以2倍差异表达值(Ratio)筛选差异表达基因。选择明显上调或抑制的基因，用Real 会议论文秦 术对相关的基因作进一步验证。结果：基因芯片高通量地揭示了胎儿、少儿和成人组表皮干细胞的遗传 信息。成人组与少儿组样本相比，差异表达基因有1808条，其中上调的基因有1089条，下调的基因有 719条；已知基因1462条(已在GeneBank登录)，未知基因346条。少儿与胎儿组样本相比，差异表达基 Bank登 Annotation 录)，未知基因957条。对筛选出的成人与少儿，少儿与胎儿的差异表达基因结果在Molecule System进行了Go分类的统计分析，根据基因功