细菌总数测定方法的研究.pdfVIP

全国排水委员会2006年年会论文集 细菌总数测定方法的研究 刘娜，陈星，庞玉凯 (天津市城市排水监测站，天津300221) 摘要；通过测定各种水质中的细菌总数，把传统平板计数法与现代膜技术做对比，从而得出这两种方法的 优缺点与适用性． 1研究的意义 在当代，随着人类工业生产活动的高速发展和人口的急剧增K，使人类赖以生存的环境受到越 来越严重的污染，水源的污染是危害最广、最大的。污水中含有各种有毒有害物质，例如农药、炸 药、多环芳烃、酚、氰等的污染后果尤为严重，污水处理越来越受到人们的重视。在污水处理方法 中，最关键、最有效和最常用的方法是微生物处理法。因此，对污水处理的水质微生物监测也是检 验污水处理效果的一种非常重要的手段。 在实际工作中经常以检查水的细菌总数，特别是检查作为粪便污染的指示菌，来间接判断水的 卫生学质量。水中细菌总数可说明被有机物污染的程度。细菌数越多，有机物含量越大。目前，水 中细菌总数的测定主要是采用平板计数技术，我们引进国外的先进技术——膜滤法与平板技术相对 比，探索出对不同水质的最为适用的方法。 2实验原理 2．1平板计数法 用1mL水样在营养琼脂中，于37C经24小时培养后，所生长的细菌菌落的总数。 2．2滤膜法 如果用滤膜法测定，则为采用滤膜过滤器过滤水样，使其中的细菌截留在适当孔径的滤膜上， 然后将滤膜放在适当的培养基上培养，细菌可直接在膜上生长，从而可以直接计数。 采用两种方法同时对各种水质进行测定，从而通过对比，找出适合于各种水质的测定方法。 3实验器材 ①高压蒸气灭菌锅、干热灭菌箱、恒温箱、冰箱 47 ②Satrious培养套盒、SatriousllLrn滤膜 ③抽滤器、泵 ④放大镜、显微镜 @试管、平皿(直径9厘米)、刻度吸管等，置于干热灭菌箱中160C灭菌2小时 ⑥琼脂蛋白胨培养基 4实验步骤 4．1平板计数法 ①以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌水的试管中，混匀成l：10 稀释液； -612． 刘娜，等：细菌总数测定方法的研究 依此稀释成l：1000、1：10000稀释液等备用，吸取不同浓度的稀释液时必须更换吸管； ③用灭菌吸管取2～3个适宜浓度的稀释液1mL，分别注入灭菌平皿内： ④待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37C恒温箱内培养24小时，进行菌落计数， 即为水样1mL中的细菌总数。 4．2滤膜法 ①剪开包装袋取出所需数量培养基； ②用3．0～3．5mL无菌水或去离子水润湿培养基； ⑧用镊子取出无菌滤膜贴放在已灭菌的滤床上，稳妥地固定好滤器； ④将100mL水样注入滤器中，加盖，打开滤器阀门，抽滤，然后用无菌水洗净滤器内壁； ⑤水样抽滤完后，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在培养基上，不得留有气泡； ⑥然后将平皿倒置，放入30C培养箱内48小时培养。 5实验内容 5．1对污水厂、河水及纯净水的测定 ①用滤膜法与平板计数法分别对污水厂进出水、河道、海河水进行TSU定。数据见图表l、图 表2。 表1 2003年11月测定的平均数 水样 滤膜法(个／mL) 平板计数法(个／mL) 污水厂进水 2×101 2．3×1矿 污水厂出水 3×104 4．2×l旷 海河水 4×103 5×103 河道水 2X105 248×105 表2 2003年11月测定的摩托罗拉超净水