编码二球悬铃木花粉主要变应原Plaa1cDNA的基因克隆及性质研究.pdfVIP

性(P0．05)，与相关文献报道相符【n·12】。这一结果也说明，尽管RA存在显著的个体差异， MMP．3仍被认为可作为疾病活动及RA预后的指标。 目前针对MMP．3治疗RA已在临床中开始运用。KlimiukPA等【13】采用英夫利昔单抗(抗 下降，同时MMPs／TIMPs比值亦有所下降。CatrinaAI等【14】研究表明，依那西普(可溶性n吓． 因其可下调MMP．3／TIMP．1，提示可能有阻止关节损害的重要作用。 编码二球悬铃木花粉主要变应原PlaalcDNA的基因克隆及性质研究 齐名陈亚利朱琴姚凯邢嘉翊 解放军南京军区南京总医院，南京210002 多种植物花粉对于过敏体质者都是吸入性过敏原，是过敏性鼻炎、过敏性哮喘等常见病 的致病因子。对这类过敏体质者进行特异性免疫诊断和免疫治疗的关键是明确引起过敏性疾 病的过敏原及过敏原蛋白的组分。多年来天然过敏原的提取物一直是用于过敏原体内或体外 诊断及特异性减敏治疗的材料。但是天然变应原存在提取困难、纯度低、易污染等缺点。近 年来随着分子生物学和基因工程技术的进展，用人工重组变应原蛋白组分取代天然变应原已 成为临床变态反应学的研究方向。人工重组变应原蛋白组分在分子结构上完全均一，在进行 特异性减敏治疗时比天然变应原更有效、更安全。为了制备人工重组蛋白，必须获得其编码 基因的DNA序列。二球悬铃木(Platanus 广为栽植的绿化树木。其花粉也是一种常见的气传吸入性过敏原，近年来发现每年春季许多 患者对二球悬铃木花粉过敏。为了制备二球悬铃木花粉的人工重组变应原蛋白，本文探讨了 研制二球悬铃木花粉主要变应原编码基因科隆的方法。 l材料和方法 1．2花粉采集 在4月二球悬铃木开花期清晨采集成熟雄花的和花蕾，将采集所得的花序 置于变色硅胶上干燥以防霉变，黄色花粉从药囊中自然脱落。用200目筛网筛去杂质，将所 获纯净花粉置-70。C保存。 1．3二球悬铃木花粉细胞总RNA提取：用TRIzol法分离总RNA。 1．4 10II dT2p1， 70。C eDNA第一链制备：用M-Mulv逆转录酶进行。总RNA 1加Oligo 4 8pl，lOmmoldNTPsIl 温育5min，置冰浴中冷却，加5Xbuffer 1，37。C温育5min，加 2 逆转录酶M-Mulvp min， 1，37。C温育6070。C终止反应，冰浴中冷却后置-70。C保存 153 作为DNA模板。 1．5编码二球悬铃木花粉主要变应原蛋白全长编码基因的PCR扩增 1．5．1引物：用Oligo6．0软件设计引物，序列如下： ．． GAATTCATGAAGCTTTCCTTCTCTCTCTGTATC一3’ 上游引物：5’一CG AGC TTT GGATCCTCA ACCAAGCAG GGT一3’ 下游引物：5’-CG 由上海申友生物技术公司合成。 1．5．2 5II 3．5|l PCR反应体系：cDNA模板2ul，加IOXbufferl，25retool l，lOmmol MgCl2 dNTP1u Il II l，Tag酶1u，引物各0．5l，加水补足到50l。94。C预变性5min。每循环94。C 30sec，57。C50s