生物酶反应器设计和其在药物代谢研究中的应用.pdfVIP

第26卷增刊 分析试验室 V01．26．swat． 2(X)7年10月 ChineseJournal 2007一10 of,huJ．1ysisIaboratory 生物酶反应器设计及其在药物代谢研究中的应用 ‘刘松琴 (东南大学化学化工学院，南京210096) 细胞色素P450酶系是一组结构与功能相关的环作用机理为：当底物与P450酶结合后，酶上的 含铁血红素同工酶，目前其成员已经发现1200多．铁原子从NADPH一细胞色素P450还原酶的电子 种，近150个家族，广泛分布于动物，植物和微生 供体分子上得到一个电子而被还原，使得铁由三 物等不同生物体内的一类代谢酶系。P450蛋白种价还原成二价；该还原的二价铁与分子氧结合， 类的多样性及其底物的重叠性使其可以催化多种 形成FeⅡ．02复合物；另—个电子和质子加到铁原 类型的反应，如羟基化作用、脱烷基作用和环氧 子上形成了FeⅢ．OOH中间产物；最后该复合物失 化作用等。P450酶系不仅对许多外来物质或者环去一个水分子后，并将其氧原子传递到底物上， 境有毒物质具有代谢作用，还参与一些具有重要 底物释放后，该酶回到原来的状态后又开始新的 生理功能的内源性物质如激素，脂肪酸的代谢， 循环。 因此P450酶系在生物体中起十分重要的作用。细 P450酶系的催化能力早在70年代就引起了 胞色素P450286(CYP286)是人体肝脏中P450CYP 酶工作者的兴趣。源于P450酶的生理功能，完整 基因族中的很小组成部分。但是，CYP286对于很 的肝细胞或者微粒体被用来作为体外解毒反应的 多结构迥异的外源物质如致癌物质尼古丁、苯乙 生物催化剂。随后，CYP参与的底物特定羟基化 烯、黄曲霉毒素B1和安定药如环磷酰胺、它莫西 反应成了工作者研究的目标。但是所有这些研究 芬、安替比林的催化作用近年来得到了广泛的关 不得不面对这样的难度：多酶体系有限的稳定性 注。 和NADPH和NADH辅酶再生的需要。为了避免这 细胞色素P450与底物的总反应可以下式子表样繁琐的工作，最终的方法就是从电极上获取酶 示： 反应所需要的两个电子。一些工作已经采用电子 2e’．2H+ 传质体来传递电极和P450之间的电子，最常见的 RH+02—1≯ROH+ri,Q 为核黄素、酚藏花红。在我们的课题中，我们选择 反应中需要两个电子和两个质子参与。在线粒体 了纳米金来实现这样的目标。纳米金有着很好的 和许多细菌中，电子是从NADH或者FAD等还原 导电能力和生物兼容性，因此能够有效的为生物 酶传递到铁一硫氧还蛋白，或者是在线粒体内质 分子提供合适的微生物环境并且保持生物分子的 网系统中，NADPH通过含黄素蛋白的FAD和FMN 活性。此外，纳米金能够缩短生物分子活性中心 即细胞色素P450氧化还原酶传递电子，而无需铁 与电极的距离，使得电子能够有效地传递到酶活 一硫氧还蛋白的中介作用，而b5也可能是提供第 性中心，从而实现了酶的直接电化学。 --t电子的来源。总体来说，P450在人体内的循 一70一