皖西白鹅催乳素基因Ezon2克隆和多态性研究.pdfVIP

晰的结果，采用的3+3引物组合，揭示了较多的多态性，同时AFLP技术在一次PCR反应中所能检测 的位点也是最多的，较之其他分子标记技术更能覆盖整个基因组，且技术本身具有较好的重复性，而且 经过荧光标记，不需银染，可迅速而准确地直接从测序仪的胶上找到所需的特异片段。当根据目标性状 合并DNA样品，形成4组近等基因小池时，这些差异条带就最大可能的与相应的目标性状连锁，即谓 之这些性状的候选基因或标记。本研究表明，用AFLP方法对一个性状分组样本分析，可以较快的找到 可能与有关性状位点连锁的分子标记。 高邮鸭的青壳性状是与蛋品质有关的一个优良性状，研究已表明：青壳鸭蛋的蛋壳厚度明显高于白 壳鸭蛋，而且青壳鸭蛋蛋白质营养价值优于白壳鸭蛋。所以青壳性状是进行高邮鸭育种的一个重要资 源，DNA分子标记技术发展上使青壳蛋生产率的提高成为现实。本研究通过重复试验说明了AFLP技 术是稳定可靠的，重复性较强。同时在优化AFLP反应体系时的试验结果表明：在一定范围内改变扩增 反应的模板数量、引物、镁离子、TaqDNA酶浓度，其扩增的DNA图谱并不受影响。利用引物组合EcoR I+ACT／Mse I+CTC扩增出的DNA图谱可以将供试的4个分离体分组混合家系全部区分开，从而 可用此AFLP标记来有效地鉴定开产前青壳和白壳性状的差异，以达到早期选育的目的。这些研究结 果无疑丰富了家禽青壳性状基因表达的研究，无疑对促进分子标记辅助选择在家禽育种中的应用具有 不可低估的作用。 皖西白鹅催乳素基因Exon2克隆及多态性研究* 耿照玉 陈兴勇 韩厚明 陈 燕 (安徽农业大学动物科技学院安徽，合肥230036) 摘要本研究以皖西白鹅为材抖，用PCR-SSCP法分析了PRL基因第二外显子的多态 性。结果表明，PRL基因第二外显子存在一个SNP位点。等位基因A频率为0．4237，B频率 为0．576 3。z2分析表明，基因型在群体内分布存在极显著差异(pO．01)。 关键词皖西白鹅；PRL基因；PCR-SSCP 多肽类激素，几乎存在于所有脊椎动物中。很多物种的PRL基因的eDNA序列或基因全序列已经测 定，并发现其转录产物在不同物种中是高度保守的。 大量研究表明，PRL对禽类就巢的发生和维持有重要的作用，并影响哺乳动物泌乳等其他性状。 因此，PRL基因被认为是与禽类繁殖及哺乳动物泌乳等性状相关的候选基因。额尔和花等采用PCR- RFLP方法检测到内含子2中的一个T／c突变产生的三种基因型与产蛋重及产蛋数可能有关联。 Jiang等在ePRL启动子区检测到一个24bp的插入，这一插入与绿壳蛋鸡无就巢性高度相关。另外，荷 *基金项目：安徽省教育厅自然科研基金资助项目(2005kjl33zd) 作者简介：耿照=ll(1963一)。男，教授 61 PRL基因(WuXueTTlel，2000)。 目前，禽类PRL基因多态性方面的研究多集中在家鸡上，而有关鹅PRL基因的多态性研究尚未见 报道。本研究以皖西白鹅为研究材料，采用PCR．SSCP方法检测PRL基因第二外显子的多态性，为进 一步研究PRL基因的功能提供参考依据。 1材料与方法 11实验材料 皖西白鹅131只，血样采自安徽省皖西白鹅原种场。翅下静脉采血2mL，ACD抗凝．1】TlL立即用 裂解液裂解，另1mL保存于一20℃耐(箱。 TaqDNA聚台酶、dNTPs、T载体昀自大连宝生物工程有限公司，引物由上海生物工程有限公司合 成，胶回收试剂盒购自U-Gene生物技术有限公司。 1 2实验方法 1 2I基因蛆DNA提取采用常规的酚一氰仿提取基因组总DNA，紫外分光光度法测定纯度后，取 部分样稀释至100ng／mL备用。 1 2 2 0在序 列保守区设计引物．引物序列如下： 胁ard：TGACCGTGCGGTTAAACrCT Reverse：GGGACTATCACTGCL可GTGC PCR反应体系为(20 2 0 5mMdNTPl5 pL)：10×BofferpL，25m