氯磺酚偶氮罗丹宁-Ti(Ⅳ)配合物荧光光谱探针测定蛋白质的研究.pdfVIP

V01．30 第30卷专辑 南昌大学学报(理科版) Suppl of Journal 2006年9月 NanehangUniversity(NaturalScience) Sept．2006 文章编号：1006一0464(2006)专辑一1022—02 氯磺酚偶氮罗丹宁一Ti(1V)配合 物荧光光谱探针测定蛋白质的研究 陈欣，孙舒婷，马洪敏，段彩虹，王晋，杜斌，魏琴 (济南大学化学化工学院，山东济南250022) 擦要：研究了氯磺酚偶氮罗丹宁一Ti(IV)形成的配合物与蛋白质在AOT微乳液存在下的相互作用，建立了一种 高灵敏的定量测定蛋白质的新方法。体系的荧光强度与BSA的浓度成线性关系，其线性范围是0—11．0斗g mL一，将该方法用于奶粉和麦片中蛋白质的测定，结果令人满意。 关键词：荧光光度法；蛋白质；微乳液；光谱探针；氯磺酚偶氮罗丹宁一Ti 中图分类号／0657 文献标识码：A 蛋白质的定量测定最常用的方法是吸光光度 B—R缓冲溶液，1．00mL的AOT微乳液，1．20 roll．0×10。mol mL1．0× 法…。包括双缩脲法H1、Lowry法口1以及基于蛋白质 L-1的CISARP，0．60 10一tool mL100 与染料结合的光度法¨1等，荧光光度法1(特别在 L叫Ti(IV)溶液，0．50 mL‘1的 ttg 某些表面活性剂的存在下拍3)，如四磺基铝钛菁】， 牛血清白蛋白。定容至10mL。静置10rain。于ex =334 丁基罗丹明B冲1等。罗丹宁类染料广泛用于金属离 nm，em=377rim处测定体系的荧光强度， 子的测定中，用于测定蛋白质的甚少。本论文中首 次采用氯磺酚偶氮罗丹宁与金属配合的染料一氯磺 BSA的荧光强度)。 酚偶氮罗丹宁一Ti(IV)作为测定蛋白质的生物光谱 2结果与讨论 探针，在测定pH条件下，使用了表面活性剂双一2 一乙基己基硫代琥珀酸钠微乳液(AOT)进一步增2．1光谱曲线 强了体系的荧光强度，取得了满意的结果。 固定=335nm，于=377nm处测定体系的荧 光强度。实验发现加入蛋白质后，荧光强度的变化 l实验部分 与蛋白质的浓度成线性关系。 1．1仪器与试剂 2．2酸度及用量的选择 mL 2．08B— 日本岛津UV一3101型紫外可见分光光度计； 考察酸度用量发现加入1．00 pH Ls一55荧光光度计；PtlS一3B型酸度计(上海精密R缓冲溶液效果最好。 科学仪器有限公司)。牛血清蛋白(BSA、人血清2．3介质及用量的选择 白蛋白(HSA)、卵清白蛋白(Ova)、一球蛋白(一 向体系中加人0．50—1．50mL的AOT微乳液 G)标准溶液：100斗gmL一，40C保存。氯磺酚偶