野生型p53基因联合化疗治疗结直肠癌肝转移地研究.pdfVIP

并在细胞内复制活化，且致其成熟受阻及其抗原递呈能力下降。提示，CMV感染可能会影响GVL 的效应。 抗人CDl 4新克隆ZCH．7．2F9单链抗体原核 表达载体的构建表达及活性鉴定 宁铂涛1 汤永民1 曹 江2沈红强1钱柏芹1张海忠1 张怡1郭 ：葡1 l浙江大学医学院附属儿童医院血液肿瘤科(杭州，310006) 2浙江大学医学院附属邵逸夫医院中心实验室(杭州，310016) 的目的蛋白，以证实所获Ⅵ。和Ⅶ基因序列的正确性，也为2F9其他类型的基因工程抗体及其免 多克隆位点内切酶位点NdeI和SmaI的核酸序列设计引物，采用高保真的1细酶，通过重叠延伸拚 by 接法(splicing 诱导目的蛋白表达，镍树脂纯化后体外复性浓缩，分别采用W．es钯mBlot和流式细胞术观察所表达 杆菌的包涵体进行纯化复性，其复性率为32．6％；经WbStemB10t方法证明其所表达ScFv2F9蛋白的 的结合有一定的阻滞作用，复性ScF珏9阻滞一次后阳性细胞百分数、平均荧光强度(MFI)和高峰 合能力，初步说明所克隆的基因序列以及表达载体构建是正确的，从而为2F9单抗的进一步基因改 造奠定了坚实的基础。 野生型p53基因联合化疗治疗结直肠癌肝转移的研究 叶再元1林筱洁1蒋行迈2张勤1陈小红1 1 浙江中医学院附属医院(杭州，3lo006)2澳大利亚新南威尔士大学 目的：制备高滴度携野生型p53基因的重组人p53逆转录病毒，感染人结肠腺癌细胞株LS—174．t 细胞(含野生型p53基因，可表达p53 36：Z 表达并观察其生物学特性。检测p53基因联合化疗药物对两种结直肠癌细胞株的作用。建立结直肠 cDNA 癌裸小鼠模型，并用p53病毒颗粒治疗。检测P53蛋自在两种细胞内的分布。方法：将人p53 进行病毒滴度测定，筛选高滴度的粥17／p53细胞克隆。用逆转录病毒env基因引物PCR法排除培 养上清液中野生型逆转录病毒的存在。收集培养上清液中的重组人p53：逆转录病毒颗粒，感染 观察该两种细胞株的生长方式、形态学和生长速度。以原始LS．174．t细胞和SW620细胞作为对照， MTT法检测DNA合成。双层软琼脂培养实验检测细胞的恶性程度。MTT法检测不同浓度的化疗药 清液中的重组人p53逆转录病毒颗粒用于治疗。SP免疫组化染色法检测P53蛋白在细胞内分布。结 细胞生长特性无明显改变。筛选到最高病毒滴度为4．64苓105c兀I／m1的的]PA317／p53细胞克隆；用 细胞组和SW620／p53细胞组的相对抑制率无显著提高。PCR法排除了培养上清液中野生型逆转录病 毒的存在，获安全的治疗性重组人p53逆转录病毒悬液。成功建立了结直肠癌裸小鼠模型，并用p53 病毒颗粒连续治疗3天，10天后未见治疗组和对照组间有显著差异。意外的是P53蛋白免疫组化染 细胞本身～50％细胞核染色呈阳性。结论：制备了携p53基因的高滴度逆转录病毒，高滴度逆转录病 的结肠腺癌细胞株特性相关。免疫组化结果显示P53蛋白聚集在细胞浆，提示p53蛋白被扣留在细 胞质中，不能进入细胞核发挥其抑制肿瘤细胞生长、促进其凋亡的正常功能。 野生型P53基因在K562细胞内的表达 林筱洁高瑞兰林圣云 浙江中医学院附属医院血液病研究所(杭州，310006) 目的：制备高滴度携野生型p53基因的重组人p53逆转录病毒，感染K562细胞，建立携野生