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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集
应用RAPD方法对猪肺炎支原体DNA多态性的研究
邵国青，于海东，还红华，倪艳秀，王继春，何家惠
0014)
(江苏农科院畜牧兽医研究所，21
猪肺炎支原体(Mycoplasma
界各养猪国家。因此，国内外对该病进行了大量的研究。但是关于Mhp致病性和毒力因子仍不太清楚。
我国在Mhp弱毒研究上取得一定的进行，多年应用表明弱毒苗具有良好的免疫效果。通过对弱毒株168
株的P。。基因研究发现，DNA中A、T表现缺失基因变为以，但强毒和弱毒的致病性和遗传性尚缺乏系
1990
年创立的一种新的DNA遗传标记技术，能够用来检测基因组DNA的多态性，以及进行种株的鉴定和分
原体基因组DNA遗传结构的差异，为进一步揭示强弱毒株问的差异研究提供材料。
1、材料和方法
1．1菌株培养：Mhp
和猪鼻支原体两株(M．hyohrinis
片瑞氏染色检查，呈多形态菌，无杂茵。
1．2
司)和10％SDS(华美)6ml，37℃作用2小时。然后加30m1酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)混匀，
10min，弃上清将沉淀溶于适量TE缓冲液中，一20℃保存备用。
1．4
dNTP2
反应总体积2串1，其中模板DNA3V，10XPCR缓冲液2．串1，2．5mMMgCl2舢l，2．5mM
l
¨l，Tag
钟，72℃延伸2分钟，45个循环后，72℃延伸10分钟，并重复2次。
1．5电泳与照相：PCR扩增产物lql加舢1，6X凝胶加增缓冲液在1．5％琼批糖凝胶上按《分子克隆》
0．5
的方法进行电泳。电泳条件为50V、45min。凝胶在溴化乙锭(O．串∥ml，pH8．0
Sciencel D系统进行照相。
分钟，紫外分析仪下检查，用KodakDigital
Science1
DNA Digital D系统分析各
1．6数据分析：以宝录曼公司1KbLodder为标准，用Kodak
606
中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集
批纹的相似值。
2、结果
2．1 本实验选用7个一引物分别对7株猪肺炎支原体2株猪鼻支原体基因组DNA进行扩增，结果每一
株所共有，有些为每一种毒株所特有(见表1)，9株毒株表现出明显的多态性，扩增产物片段长度在227
5696bp之间，但引物S37对J株，引物sll3对168F322未能扩增出任何产物。
表一7种引物对不同毒株所产生的RAPD条带长度
量i塑 』 丝匹塑至望 坚避塑垂! !鲤里2Q !鱼曼里1231垒曼里盥 !鱼曼旦§85 堑昱! 猹盎里
S。， 381 38l 472 847 1216 1944 1944 651 2270
1615 1615
546 472 784 1216 784
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