载脂蛋白E基因敲除小鼠和其在心血管病中西医结合研究中的应用.pdfVIP

全国中西医结合冶疗。血管病及血瘀证高级论坛和研修班 载脂蛋白E基因敲除小鼠 及其在心血管病中西医结合研究中的应用 张文高郑广娟王显刚刘龙涛吴敏张亚同马学盛 山东中医药大学(济南250014) 高脂血症、动脉粥样硬化(As)及其所导致的心脑血管疾病是当今人类健康的主要杀手．防治 高脂血症、As，特别是稳定As斑块，对于防治常见心脑血管病、改善其预后有着极重要的价值。高 脂血症和As发病机理复杂，涉及到多种外界环境等后天因素和遗传因素的综合作用，其发病机理尚 有许多不明之处，给防治策略的制定与防治方法和药物的寻找带来许多困难。高脂血症和As的病理 机制与干预措施研究都离不开相应的动物模型。目前(特别是国内)所用的动物模型大多为控制饮 食等后天因素，例如食饵法(高脂膳食)、免疫损伤法、机械损伤法、静脉注射胆固醇～脂肪乳法等。 这些动物模型与人类疾病的差异性和局限性在不同程度上制约了对高脂血症和As的研究。 美国洛克菲勒大学生化遗传与代谢实验室和北卡罗莱那大学病理遗传实验室应用胚胎干细胞基 因敲除(gone 常饮食下即可形成明显的高脂血症及弥漫纤维增殖性As损伤病灶。其所致的As模型是缘于遗传因 素损伤，其病变更接近于人类As，与进食高脂饲料发生As的动物有根本区别，具有自然发生、渐 进发展、病理形态典型等特点．成为研究As发病机理和干预措施较理想的动物模型，也是筛选抗 As药物及机理研究的良好实验平台。该模型在国内应用很少。仅近几年北京、广卅I等地的学者利用 该模型研究有氧运动、膳爵脂肪、黑米皮及他汀类药物对As斑块形成的影响。除了本课题组外，国 内外还未见利用ApoE基因敲除小鼠进行中医药、中西医结合研究的报道。现结合本课题组的系列研 究就该模型及其在心血管病中硬医结合研究中的应用作概要介绍。 一、藏腰蛋白E基因藏除小鼠瘸理特点 (一)高脂血症与As Sunny 水平的5倍左右，并且在饲养至3个月时近端主动脉即出现大量泡沫细胞沉积，8个月时冠状动脉 口处由于粥样硬化斑块的发展已形成严重的闭塞。这种小鬣虽然病变严重，但仍能在一般条件下存 活。认为ApoE基因敲除小鼠对于As的遗传学基础和发展过程中环境等多方厩的研究将带来巨大的 进步。Yutaka 附于损伤的内皮细胞处，8～10周龄出现脂纹，15—20周龄后逐渐出现纤维斑块，病变部位以主动脉根 部最为明显，其次为胸主动脉。把ApoE基因敲除小鼠分为低脂饮食组和高脂饮食组，分别在6、8、 种小鼠，同其它As小鼠模型比较，ApoE基因敲除小鼠不仅能够在瓣膜基底，而且能够在所有胸腹 动脉中形成广泛的粥样硬化病变，如主动脉分支、颈动脉、肺动脉等，认为ApoE基因敲除小鼠的 149 全国中西医结合治疗。血管病及血瘀证高级论坛和研修班 As病变的发展同人类极其相似。 (二)As不稳定斑块 Jams 近年来，RosenfeldME和w“l H分别报道了ApoE基因敲除小鼠可于30周龄左右形成明 显的不稳定斑块(包括斑块内出血、钙化甚至破裂)。FlorianBea等从形态学角度观察了辛伐他汀 对ApoE基因敲除小鼠As斑块稳定性的影响，认为该药能够增加斑块纤维帽厚度、降低脂质核心大 小、减少出血及钙化等，而达到稳定斑块的作用。表明该动物模型十分适合于药物干预As斑块稳定 性的研究。 (三)心肌微动脉内“微病灶”与外膜炎症 胡维诚等对60周和2年的ApoE基因敲除小鼠心脏心底部分作连续切片，用改进的Movat法进 um)内都发现了在原位 行染色，在每一个ApoE基因敲除小鼠冠状动脉的细小分支【直径为30—300 形成的一种病灶，命名为“独立病灶”。这类病灶由若干含有蛋白聚糖基质和脂质的细胞组成，表面 由内皮细胞复盖。独立病灶全部位于心室壁微小动脉内，又多见于左室壁。有些病灶能够完全堵塞 血管。随小鼠年龄增加，病灶数目无明显增多，但体积大的病灶增多。在2岁小鼠心肌微动脉内发 现了与典型As病灶极为相似的病灶，提示这类病灶为早期As病灶。所有存在独立病灶的外膜均有 明显的血管周围