抑癌基因nm23对胃癌淋巴转移作用地研究.pdfVIP

抑癌基因砌对胃癌淋巴转移作用的研究 曲明阳邢光明冯秉安 大连医科大学第二粘床学院(116023) endothelial 擅赛目的研究胃癌淋巴转移的血管内皮生长因子C(vascular factor metastasis growth C，VEGF-C)相关机制，探讨抑癌基因nm23(nonegene23) 表达对胃癌淋巴转移的影响。方法采用免疫组化SP法检测68例人胃癌组织中nm23、 析。结果淋巴结阳性标本VEGF-C阳性率和淋巴管密度显著高于淋巴结阴性标本组 阳性组淋巴管密度明显增高(29．60／21．40，pO．05)。与淋巴结阴性标本组比较， nm23-H1蛋白表达阳性率在淋巴结转移阳性标本组有显著降低(26．32％／70．00％， 相关(B一0．907)。结论VEGF-C的表达与胃癌的淋巴结转移关系密切；VEGF-C主要 通过调节肿瘤组织微淋巴管的生成而影响肿瘤淋巴结转移；nm23-H1蛋白可通过下调 VEGF-C表达、抑制胃癌淋巴管的生成而抑制肿瘤转移。 VEGF_CLMVD 关键词s胃癌淋巴转移nm23-Hl 胃癌是最常见的肿瘤，患者主要死于复发和转移，而淋巴转移是其最主要的转移方 式。目前肿瘤淋巴转移机制不明。VEGF--C是血管内皮生长因子家族的成员，它可与特异 其与肿瘤转移抑制有关。在消化道恶性肿瘤中nm23表达阴性的肿瘤，癌细胞发生转移的 比率明显高于表达阳性者强3。本研究探讨胃癌nm23表达与微淋巴管发生及淋巴转移的 155 关系，探讨其在胃癌预后中韵价值． 材辩和方法 一、材料 1．标本：胡例胃癌组织标本取自大连医科大学附属第二医院普外科2002年2月一 任何治疗，均经临床病理学确诊。其中区域淋巴结阳性者38例，阴性者30例。 2．试剂： Santa Cruz公司产品。 (2)SP免疫组化试剂盒、DAB显色系统购自北京中山生物公司。 二、方法 1．免疫组化： 采用sP法。所有标本经常规石蜡包埋，制备51am厚连续切片贴附于涂有10％多聚 赖氨酸的载玻片上。切片常规脱蜡至水，3％H。0：lOmin阻断内源性过氧化物酶，正常家 VEGFR一3(1：50)一抗湿盒中孵育，4C过夜，PBS充分洗涤(5minX3次)，生物素化 蒸馏水终止显色。苏木素轻度复染(1min)。脱水、透明、中性树脂封片，光镜下观察。 PBS代替一抗作为阴性对照。 2．结果判定： 阳性表达，细胞不着色或呈淡黄色为阴性，400×光镜下随机选取5个视野，以定位明 性，而染色弱或完全不染色者为nm23-H1或VEGF-C阴性。 (2)肿瘤组织微淋巴管计数：采用Weidner阳1等的方法，先在低倍镜下寻找新生脉 管蕞密集的区域即“热点”(hotspot)，然后在高倍镜下观察染成棕色的单个细胞和 细胞丛，并以此作为一个脉管。以5个高倍镜视野脉管的平均数表示脉管数。与抗体起 l锚 反应的巨噬细胞和浆细胞在镜下根据形态学予以捧除。 3．统计学处理： 采用SPSSiO．0软件进行统计学分析。两个独立样本均数比较采用t检验；多个样本 间的两两比较采用单因素方差分析；多变量间相关性采用logistic回归进行分析。 结 果 1、nm23一Hl免疫染色结果： ％，nm23-H1阳性物质位于细胞浆内，为棕黄色颗粒或者团块(图卜3)。 2．VEGF-C免疫染色结果： 阳性物质位于细胞浆内，为棕黄色颗粒(图4—6)。 3．微脉管染色结果： 在胃癌组织的边缘及癌周可见VEGFR-3阳性微淋巴管，呈棕褐色，多为条索状(图 7—9)。 由下表可见，VEGF-C阳性率在淋巴结转移阳性