血管形成因子VEGF、TGF-α、TGF-β1在血管瘤中表达地研究.pdfVIP

化因子突变体拮抗剂已研究成功，通过研制MIP一3p拮抗剂，阻断Dc的迁移而抑制免疫排斥，是今后 器官移植新的治疗手段，对进一步揭示移植免疫的本质，促进器官移植的发展具有重要的意义。 血管形成因子VEGF、TGF—a、TGF—p1 在血管瘤中表达的研究 华中科技大学同济医学院附属协和医院整形外科 (430022)张一鸣张竣 前 官 血管瘤为婴幼儿期常见的肿瘤之一，女性多于男性，性别之比为3；1。血管瘤可以发生在身体的任 何部位，多见于皮肤和皮下组织，其次为口腔粘膜和肌肉，再次为骨骼、脾及神经系统，偶可发生在消化 道、肾脏等组织。血管瘤具有快速生长的特点，严重者可引起部分器官的功能障碍，甚至威胁到患儿的生 命。目前，应用于临床的治疗方法很多，如激光疗法、放射疗法、注射疗法、全身药物疗法、栓塞疗法、手术 疗法等，但存在着复发等问题，且对于大面积血管瘤、多发性血管瘤、进展迅速的血管瘤及伴有严重并发 症的血管瘤，尚缺乏确切且迅速有效的治疗方法。因此，进一步深入研究血管瘤的发病机制，进而选择有 效快捷的治疗方法具有重大意义。 血管形成因子是一种能诱导或促进新生毛细血管形成的物质，分为两大类：肽类生长因子和低分子 量血管形成因子。目前已经发现很多重要的血管形成因子，尤其是肽类生长因子，包括VEGF、FGF、 TGF—a、TGF—B、TNF—a等。随着肿瘤血管研究的不断深入，血管形成因子在血管形成中的作用越来 越受到重视，但血管形成因子对血管瘤的作用研究很少。 传统的血管瘤分类是根据形态学来划分的，一般分为毛细血管型血管瘤、海绵状血管瘤、混合型血 管瘤及蔓状血管瘤。Mulliken在培养血管瘤标本的内皮细胞时，观察到这些细胞中具有增殖活跃和相 对稳定两类不同的特性，结合临床表现，提出把血管瘤重新划分为血管瘤和血管畸形两大类型的设想， 称之为细胞生物学分类。基于这种分类，血管瘤的概念限于指主要通过细胞增殖而增大的血管源肿瘤， 强调的是肿瘤的特性，而其它类型都归入血管畸形，强调的是先天的脉管系统的畸形及相应的异常血流 动力学特征。由于两者在发病机制、病理变化、临床经过和预后上均不相同，鉴别诊断十分重要。 细胞生物学分类标准是以标本内皮细胞培养的细胞特性为基础，缺乏简捷、可靠及客观的诊断标 准，一定程度上影响了细胞生物学分类的广泛应用。本实验通过免疫组织化学方法测定VEGF、TGF— a、TGF一81在血管瘤和血管畸形中的表达情况，研究血管瘤和血管畸形的不同，探讨血管形成因子与 血管瘤发生、发展的关系，从该层面推断血管瘤的发病机理，探索新的诊断治疗方法。 材料和方法 一、实验材料 1、标 本 所选取的标本均来自华中科技大学同济医学院附属协和医院，选择2001年经病理确诊的增生期草 莓状血管瘤、蔓状血管瘤各8例，患者年龄为28天～11岁。上述组织标本经手术取出后立即放入10％ 福尔马林液固定，常规石蜡包埋，制成5弘m厚连续切片。每例切片均有HE染色对照，光镜下按 Mulliken标准进行分类，结果8例增生期草莓状血管瘤为血管瘤，8例蔓状血管瘤为血管畸形。同时设8 例正常皮肤标本作对照。 2、主要试剂 (1)一抗：兔抗人血管内皮细胞生长因子，兔抗人转移生长因子一a，及兔抗人转移生长因子一B1均 为武汉博士德生物工程有限公司。 (2)SABC试剂盒(含生物素化二抗)也购于武汉博士德生物工程有限公司。 ·85· 3、主要仪器设备 (1)石蜡切片机一台 (2)微波烘干箱一台 (3)OLYMPUS双筒光学显微镜及照相系统 二、实验方法 石蜡切片制作 将手术切取组织切成3mm厚，所有的标本离体后均用10％中性甲醛溶液固定16～24小时后，脱 水，石蜡包埋，制成腊块保存。待标本收齐后，用石蜡切片机切成5肛m厚的切片，再将其平铺于涂有 APEs的干净玻片上，50℃烤片1小时。 免疫组化染色(SABC法) (一)步骤 1、石蜡切片，经二甲苯脱蜡至水。 3。 2、O．01mol／LPBS洗3minx 3、滴加3％H202甲醇，室温内20min。 4、微波炉至95℃，加热15min修复抗原，PBS冷却5min。 5、滴加正常羊血清，室温