虾青素对D-半乳糖老龄大鼠骨质影响_医学论文.docVIP

虾青素对D-半乳糖老龄大鼠骨质影响_医学论文 虾青素对D-半乳糖老龄大鼠骨质影响_医学论文 【摘要】 目的 研究虾青素对D-半乳糖致衰老大鼠骨质的影响。方法 用D-半乳糖注射Wistar雄性大鼠5个月，建立衰老模型，测定青年对照组、致衰老模型组、虾青素组和正常老龄对照组骨常规参数并进行比较分析。结果 致衰老模型组骨密度、骨结构力学参数、生物力学参数、骨钙、镁、锰及羟脯氨酸含量与青年对照组比较有所降低，差异有统计学意义(0；而骨磷含量、骨和血清碱性磷酸转移酶与青年对照组比较有所升高，差异有统计学意义(0；这些变化与正常老龄对照组的变化趋势一致，并比后者变化得更显著。相比之下，虾青素组在上述参数指标与致衰老模型组比较差异有统计学意义(0。结论 长期大量摄入D-半乳糖导致大鼠衰老同时可能诱发其发生骨质变化，而虾青素可以预防或降低此类致衰老骨质变化的发生。 【关键词】 骨质疏松 　　D-半乳糖衰老机制是指在一定时间内，给动物连续注射大剂量的D-半乳糖，使机体细胞内半乳糖浓度增高。在醛糖还原酶的催化下，还原成半乳糖，该物质不能被细胞进一步代谢而堆积在细胞内，影响细胞的正常生理代谢，导致机体衰老〔1〕。衰老过程常会伴随着老年性骨质疏松症的发生，因此，利用致衰老模型探索致老年性骨质疏松症发病机制具有一定的研究价值。虾青素是一种非维生素A原的羟酮式类胡萝卜素，广泛存在于自然界的海洋动物体、藻体及少数陆生植物体内并具有多种生物学功能，其中尤以抗氧化、防止心血管疾病、提高免疫力和抗癌作用明显〔2〕。本实验旨在通过虾青素对骨质常参数如骨密度、骨结构力学参数、生物力学参数、主要骨矿物质(钙、镁、锰、磷)、血清磷钙、羟脯氨酸含量及碱性磷酸酶活性等来研究此类化合物对D-半乳糖致衰老大鼠骨质的影响。 　　1 材料与方法 　　1主要仪器和试剂 Labconco冰冻真空干燥仪(法国乐高公司)；752分光光度计、AE100电子天平(中国伯乐公司)；电热三用水箱、KA-1000型台式离心机(中国杭州华亭公司)；960型荧光分光光度计、J2-SH高速冰冻离心机、Lunar-XR型双能X线骨密度测定仪、岛津万能实验机、火焰原子吸收分光光度计(日本岛津公司)；C30柱(YMC Carotenoid S-5,Waters)高效液相色谱(HPLC)(Waters 600E溶剂输送系统，PDA-2996二极管阵列检测器Waters),丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)测定度剂盒(南京建成生物工程研究所)；虾青素乳化剂(瑞士罗氏公司)；乙腈、甲醇、甲基叔丁基醚(MTBE)(美国迪马公司)；无水乙醇(北京化学试剂公司)；大孔吸附树脂(天津农业股份公司)。 　　1乳化剂破乳制备虾青素 　　1虾青素萃取 称取10g乳化颗粒，加入300ml丙酮-正己烷萃取。将脂溶性相收集，再进行浓缩处理。 　　1虾青素提取液柱色谱纯化 (1)装柱：将活化好的氧化铝装填于玻璃层析柱中，用正己烷润湿。(2)洗脱：分别取2ml虾青素提取液上柱，用50ml正己烷-丙酮淋洗，收集洗脱液。将洗脱液用氮气吹干制粉备用。 　　1虾青素鉴定 根据其高效液相色谱(HPLC)中保留时间和紫外可见吸收光谱的特征峰与标准品对照进行鉴定。 　　1动物实验 　　1半乳糖致衰老动物骨质疏松症模型的建立 6周龄Wistar雄性大鼠45只随机分为3组，即致衰老模型组、青年对照组和虾青素组，每组15只，另购16月龄同品系大鼠15只作为正常老龄对照组。致衰老模型组和虾青素组每天用1的D-半乳糖颈背部皮下注射，剂量为0，其中虾青素组每天每只以0l灌喂20mg/(kg·bw)，所用虾青素由本实验室提供。青年对照组注射等量的生理盐水，每天1次，连续注射5个月，自由进食进水。实验结束时称量鼠的体重并取各组大鼠，称重后乙醚麻醉，暴露腹部，下腔静脉取血，待测血清中MDA含量、血清钙、血清磷、血清碱性磷酸酶(ALP)，血中SOD活性；分离各组大鼠的双侧股骨，测定骨长度、骨质量、骨密度、骨结构及生物力学指标；骨中钙、磷、锰、镁、羟脯氨酸含量和骨中ALP活性。 　　1生化指标测定 MDA含量测定硫代巴比妥酸(TBA)比色法；SOD活性测定采用亚硝酸盐法。 　　1其他测定指标 血清ALP活性采用氨基氨替比啉测酚法测定；血清钙用乙二胺四乙酸(EDTA)滴定法；血清磷采用孔雀绿微量比色法；骨中ALP采用化学免疫法试剂盒测定(中国科学院生物物理所中生公司)。 　　1股骨骨密度测定 取股骨解冻后置于骨密度测定仪上，分近段、骨中段、远段3部分测其骨密度。近段和远段代表松质骨骨密度，骨中段代表皮质骨骨密度。测定参数：扫描宽度20nm，扫描速度7mm/s。 　　1骨结构力学和生物力学的测定 取大鼠左股骨，用千分尺测量右侧股骨的长度；用分析天平称量两侧股骨的重量；将