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第1章 植物组织培养实验室的构建和操作技术（7学时） 第一节 商业性组织培养实验室和小工厂的设计与主要设备 第二节 培养基及其配制 第三节 外植体的选择与培养 第四节 试管苗的驯化与移载 本章小结 目的要求： (1)掌握组织培养实验室的设计； (2)掌握组织培养常用的实验仪器设备及其使用方法； (3)掌握调控组织培养的主要环境条件。 (4)掌握灭菌和消毒的区别； (5)掌握灭菌的不同方法和具体操作过程； (6)掌握无菌接种的步骤； (7)掌握外植体的培养方法和步骤； (8)一般掌握外植体褐变和玻璃化的处理方法； (9)掌握试管苗驯化的基本程序； 在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来设计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 第一节 商业性组织培养实验室和小工厂的设计与主要设备 一、设计 一个标准的组织培养实验室应当包括：洗涤室、配置室、无菌室、培养室、观察室等。在实际中可结合可行条件，合并一部分。 （一）洗涤室(cleaning room) 洗涤室用于完成玻璃器皿等仪器的清洗、干燥和贮存。室内应配备大型水槽，最好是白瓷水槽。为防止碰坏玻璃器皿，可铺垫橡胶。上下水道要畅通。备有塑料筐，用于运输培养器皿。备有干燥架，用于放置干燥涮净的培养器皿。 （二）准备室(repairing room) 准备室要求明亮、通风。在准备室内要完成培养基制备以及试管苗出瓶、清洗与整理工作。如果房间较多，可将准备室分为洗涤室和配置室两部分。洗涤室专门负责试管苗出瓶与培养器皿的清洗工作；配置室则负责培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。 （三）缓冲室 进入无菌室前要在缓冲室里换上经过灭菌的卫生服、拖鞋，戴上口罩。应当在此室内安装灭菌用的紫外灯。控制无菌室及培养室的配电板等。 （四）无菌操作室（transfering room） 接种室是进行植物材料的分离接种及培养物转移的一个重要操作室。其无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。 在工作方便的前提下，接种室宜小不宜大，一般7～8m2，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。 接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装1-2盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。 （五)培养室（culturing room）????? 培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养架略高为宜，周围墙壁要求有绝热防火的性能。 培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成，一般 设5层，最低一层离地高约l0cm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高1.7m左右。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计，如采用40W日光灯，则长1.3m，30W的长lm，宽度一般为60cm。 培养室最重要的因子是温度，一般保持在20～27℃左右，具备产热装置，并安装窗式或立式空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70％～80％为好，可安装加湿器。 控制日光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照10～16h也有的需要连续照明。短日照植物需要短日照条件，长日照 植物需要长日照条件。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。在阴雨天可用灯光作补充。 （六）驯化室 驯化室要求清洁无菌，配有空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪、喷雾器、光照调节装置、通风口以及必要的杀菌剂。 （七）温室 应配有空调机、通风口、加湿器、恒温恒湿控制装置、喷雾装置、光照调节装置以及必要的杀菌杀虫装置及相应药剂。 二、仪器设备和器皿用具 （一）仪器设备（见实验室设计） 1．超净台，优点是操作方便自如，比较舒适，工作效率高，准备时间短。开机10分钟即可操作，可进行长时间使用。在工厂化生产中，接种工作量很大，需要经常长久地工作时，超净台是很理想的设备。超净台功率在145～260W左右，它装有小型鼓风机，使空气穿过一个前置过滤器，在这里把大部分空气尘埃先过滤掉，然后再使空气穿过一个细致的高效过滤器，它除去了大于0.3um的尘埃、细菌和