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青霉素酰化酶的固定化与应用新进展_药学论文 青霉素酰化酶的固定化与应用新进展_药学论文 作者：周成 王安明 王华 杜志强 祝社民 杨明 张俊 沈树宝 【摘要】 青霉素酰化酶被广泛应用于半合成抗生素及中间体的制备、手性药物的拆分和多肽合成等方面。高效固定青霉素酰化酶能提高酶对温度、pH值、溶剂极性等方面的适用性和反复使用的稳定性，将成为拓宽青霉素酰化酶在工业中应用的必然选择和关键。本文主要介绍了青霉素酰化酶固定化技术的进展，讨论了不同固定化技术的特点和固定化酶在非水相体系中的催化作用，并展望了固定化青霉素酰化酶的发展前景。 【关键词】 青霉素酰化酶； 载体； 固定化； 反应介质； 固定化酶的应用 ABSTRACT Penicillin acylase is widely used in semipenicillin acylase to temperature, pH, polarity and the stability of its reuse, will become an inevitable choice and key for lengthening the lifetime of penicillin acylase. We review the progress on the techniques of immobilizing penicillin acylase, and discuss their characteristics and catalysis in different reaction media. Furthermore, the perspectives of penicillin acylase are also presented. KEY WORDS Penicillin acylase; Carrier; Immobilization; Reaction medium; Application of immobilized enzyme 1 固定化的载体 有效固定是固定化青霉素酰化酶的核心技术，载体的材料选择与制备是技术的关键。性能优越的载体能提高固定化酶的催化性能，降低酶法生产成本。 1.1 有机高分子载体 有机载体具有较好的机械强度且已产业化。天然有机高分子载体无毒性、传质性能好，常用甲壳素和壳聚糖［2］。合成的有机高分子强度大，但传质较差，如聚乙烯醇［3］和聚丙烯酰胺［4］等。Mateo等［5］选用EP类高密度环氧结构的载体固定青霉素酰化酶，过程如图1所示。Pasini等［6］研究Eupergit C载体固定化酶，催化活力较游离酶明显增加，重复使用稳定性好。 1.2 无机分子载体 随着材料学的迅速发展，出现了具有多维孔道结构介孔分子筛的载体，可制备高活性高稳定性的固定化酶。何静等［7］报道的介孔分子筛MCM具有高比表面积、较小扩散阻力的特点，可吸附固定，也可利用载体表面醛基与酶蛋白的氨基相互反应共价连接。Roger等［8］实验表明MCM载体的孔径(3～3.5nm)明显小于青霉素酰化酶尺寸(7nm×5nm×5nm)，载体可大部分与酶以吸附形式固定。Roger等研究了硅载体通过交联剂与酶共价固定的过程，如图2所示。此硅载体孔径较大，固定化酶的干酶活力达110BPUg-1，活力回收80%，热稳定性明显优于Eupergit C固定化酶。薛屏等［9］以MCM介孔分子筛为载体，固定青霉素酶12h，相对活力65.10%；肖清贵等［10］研制的中空硅微管载体，负载率和活力回收分 图1 青霉素酰化酶与高密度环氧载体共价结合过程别为97.20%和88.80%；Bernardino等［11］研制的磁性硅载体可减少扩散阻力，便于催化剂分离回收；王卫等［12］研究的磁性环氧颗粒载体最适pH和温度分别为8.5和45℃，交联密度为30%，固定化酶经使用80次仍保持94.2%的催化活力。 采取对无机载体先表面修饰再与酶固定的方法，性能有很大提高。本课题组曾采用表面氨基的介孔二氧化硅固定青霉素酰化酶［13］，相对活力达90%以上，循环使用10次后催化活力仍保持初始条件的94%。此外选用介孔泡沫硅(MCFs)载体固定青霉素酰化酶，制得的MCFs载体［14，15］经电镜检测，颗粒表面密集分布大量孔道，孔径较大呈泡沫状。由BET法计算得到MCFs的比表面积为331.43m2/g。由BJH公式计算得到的孔体积及平均孔径分别为2.16cm3/g和26nm。固定化酶负载率约95%，催化活力最高达200U/mg以上，载体性能较好。 1.3 复合载体 有机载体和无机载体各有优势。有研究立足于结合这两种材质的载体，改进材料的性能，如针对壳聚糖颗粒机械强度不够和比表面积不大的缺点，用无机多孔材料硅藻土在