颈椎间盘蛋白多糖聚合体的分布及其意义_医学论文.docVIP

颈椎间盘蛋白多糖聚合体的分布及其意义_医学论文 颈椎间盘蛋白多糖聚合体的分布及其意义_医学论文 【摘要】 目的 探讨颈椎间盘蛋白多糖聚合体的分布及其意义。方法 本研究利用本室自行制备的透明质酸特异性荧光探针，运用探针杂交技术，观察蛋白多糖聚合体在胎儿、正常成年人病理颈椎间盘中不同的形态学分布。结果 蛋白多糖聚合体多分布在细胞表面胶原纤维间等特殊部位，其分布随年龄增加而逐渐减少。结论 蛋白多糖聚合体的合成随年龄的增加而减少，推测其可能为颈椎间盘退变的病因之一。 【关键词】 蛋白多糖聚合体 颈椎 椎间盘 ［ABSTRACT］ObjectiveTo study the distribution of proteoglycan aggregate in human cervical interthe morphologic distribution of proteoglycan aggregate.ResultsProteoglycan aggregates were mostly found on the cellular surfaces and between the collage fibers in both anulus and nucleus regions. The distribution gradually decreased following the growing of the age. ConclusionThe synthesis of proteoglycan aggregate decreases following the growing of the age, which is speculated that may be one of the causes of cataplasia of intervertibral disc. ［KEY WORDS］proteoglycan aggregate cervical vertebra interrtebral disc 颈椎间盘退变所致颈椎疾患系颈肩痛的常见疾患之一。有关腰椎间盘退变的基础研究较多［1～3］，而有关颈椎间盘的基础研究则不多。为此，本研究采用透明质酸荧光探针方法，对颈椎间盘细胞外间质蛋白多糖含量进行了分析。现报告如下。 1 材料与方法 1.1 样本来源 1.1.1 胎儿椎间盘 正常流产胎儿1例，胎龄为33周。死后5 h内切取其C3,4～T1,2完整椎间盘，于清洁尼龙袋内贮存在液氮（-170 ℃）中备用。 1.1.2 正常成年人椎间盘 颈椎外伤后手术的病人2例，男女各1例，年龄分别为54、38岁。外伤后24 h内手术，分别取出C4,5、C5,6椎间盘。贮存方法同胎儿椎间盘。 1.1.3 病理椎间盘 颈椎椎间盘突出症病人3例，男2例，女1例；年龄34～56岁。手术取出C4，5椎间盘2例，C5，6椎间盘2例。取出的椎间盘30 min内液氮速冻，贮存方法同胎儿椎间盘。 1.2 椎间盘组织冷冻切片的制备 将冻存的椎间盘样本于使用前1 d切成5 μm厚的切片。胎儿与正常人椎间盘分成纤维环、髓核两部分切片，病理椎间盘每例为1张切片。切片后快速固定液固定，贮存于-20 ℃的冰箱中备用。 1.3 蛋白多糖聚合体荧光探针的制备 1.3.1 取材 生后2 d的小牛1只，颈动脉切开插管放血致死，死后1 h内取双侧肩胛软骨，剪成约0.5 cm×0.5 cm大小碎片，于无菌小玻璃瓶内贮存在液氮中备用。 1.3.2 蛋白多糖的提取 将牛的肩胛软骨碎片与2倍体积的含蛋白酶抑制剂的4.0 mol/L盐酸胍缓冲液（pH 5.9）置于0 ℃下充分粉碎混匀，4 ℃下振荡90 h，然后以13 000 r/min离心45 min，上清液在4 ℃下对水透析24 h，换液，13 000 r/min离心透析30 min，取上清液真空冻干，-20 ℃贮存。依据HASCALL等［2］的方法，氯化铯密度梯度分离提取蛋白多糖单体、透明质酸和连接蛋白。真空冻干后密闭-20 ℃贮存。 1.3.3 荧光探针液的制备 按文献［1］的方法。 1.4 椎间盘冷冻组织切片的染色及观察 以磷酸盐缓冲液充分冲洗组织切片，滤纸拭干。每张切片加100 μL探针液，37 ℃下孵育30 min， PBS缓冲液冲洗3次，每次5 min。滤纸拭干后，迅速于荧光显微镜下观察，以相同的条件照相。 2 结 果 2.1 胎儿颈椎间盘蛋白多糖聚合体的分布 胎儿颈椎间盘组织中有大量细胞成分，髓核中主要为脊索细胞，纤维环中存在大量的成纤维样细胞。荧光显微镜下，各节段髓核中的蛋白多糖聚合体主要分布在脊索细胞表面，与细胞形态一致。同时细胞间质中也存在着散在的