次黄嘌呤传感器与其在心肌细胞研究中的应用.pdfVIP

!!竺丝皇坌堑垡兰—— 次黄嘌呤传感器及其在心肌细胞研究中的应用 朱民 施国跃 刘敏 金利通+ (华东师范大学化学系，上海200062) 关键词：次黄嘿吟，黄嘌呤氧化酶，金溶胶，心肌细胞 冠心病的基本病理生理过程是心肌缺血。缺血时黄嘌呤脱氢酶被水解转化成黄嘌呤氧 化酶，同时三磷酸腺苷ATP分解为黄嘌呤氧化酶的底物次黄嘌岭，并聚积在组织中，因此 测定次黄嘌呤水平对诊断人体疾病具有重要的意义…。在生物研究中，次黄嘌呤的测定通 常采用的化学发光法“31不能做到实时在体测定，而基于酶固定化修饰的生物微传感器可 以实现对生物物质的高效、高选择性的在体实时检测“’“。 金溶胶作为一种纳米材料，其比表面积大，表面原子数多，催化活性好。已有文献报 道将其修饰在微传感器上并成功地测定了一些物质”…。本文将Nafion／XOD／Au溶胶修饰 在Pt电极上，研制成次黄嘌呤生物微传感器，将该微传感器用于研究在药物L一精氨酸 (L-hrg)和乙酰胆碱(Ach)的刺激下，心肌细胞中次黄嘌岭的产生和浓度变化过程。 结果与讨论 本文采用原子力显微镜(AFM)对金溶胶颗粒大小进行表征。图1为Au溶胶的AFM图， 金胶粒的尺寸在7～14Ⅲ左右。 我们以Nafion／Au／Pt修饰微电极为工作电极在 O～+1．OV(VS．SCE)的电位范围内研究了电极对H202的 催化氧化性能。结果表明，微修饰传感器上H舭氧化 峰电位比未修饰Au溶胶的Nafion／Pt微电极上H202的 氧化峰电位负很多，且电流比裸电极明显增大。 在上述工作基础上，制备了Nafion／XOD／Au／Pt微 传感器并用i-t技术测得NafionlXOD／Au／Pt微传感器 L_l 对次黄嘌呤的响应曲线，在2．0x10一～2．0x10。5mol 浓度范围内，响应电流与}I】【浓度呈良好线性关系，线 mol L。相 性相关系数y=O．9994，检测限为1．OxlO。7 9岖J 0fA“”“mo 对标准偏差为5．4％(n=6)。40C下保存，一个月后仍保 el黧蛔旭8 持90％的活性。 恒温条件下(37℃)，插入到HBSS溶液中，尽量贴近心肌细胞，记录加入刺激剂后的电 mol／L 流变化。Fig．2A中可以看出，在加入50此2．0×104L_Arg后，电流响应约为 60pA；加入50此2．0×10’2mol／LAch后，电流增加30pA，如图Fig．2B所示。心肌细 胞缺血性损伤过程中，在胞外检测到次黄嘌呤的释放，可能是因为缺血损伤导致细胞膜的 通透性变好，胞内ATP大量降解的产物次黄嘌呤易流失至胞外的缘故。 ’通讯联系人，本课题为国家自然科学基金资助项目(No 苎丛旦全里皇坌堑些兰堂查垒望堡塞叁一一——— 《 《 o o 也 山 _ 一 、 目 自 ￡ 岂 = 暑 U U bioseusorin i-t of withNo