阿霉素脂质体和长循环热敏脂质体的研制及其抗肿瘤作用研究.pdfVIP

阿霉素脂质体与长循环热敏脂质体的研制 及其抗肿瘤作用研究 董兰凤范美菊杨丽 吕占军 (河北医科大学实验动物学部) 摘要 目的制备阿霉素脂质体、阿霉紊长循环脂质体(TTSL)和阿霉素长循环热敏脂 质体(LTSL)。研究不同类型脂质体对H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用，观察阿霉索在小鼠 体内的组织分布以及对肿瘤、心脏等不同组织的影响。并探讨其抗肿瘤机制。方法：采用旋转 真空逆相蒸发法制备阿霉素脂质体、阿霉索长循环脂质体和阿霉素长循环热敏脂质体。阿霉素 及各种阿霉素脂质体均以5m∥l【g体重的剂量尾静脉注射给药。热敏脂质体给药后，立即将荷 瘤小鼠麻醉并在肿瘤局部水浴加热至41℃，持续1h。以荷瘤小鼠的瘤重为指标，观察药物的抗 肿瘤活性并计算抑瘤率。以荷瘤小鼠的存活天数计算生命延长率。以高效液相色谱法(HPLC) 研究静脉给药后游离阿霉素以及各种阿霉素脂质体药代动力学规律及组织学分布特征。石蜡 包埋切片，HE染色。显微镜下观察各种阿霉素脂质体对肝、一IL,、脾、肺、肾以及肿瘤组织的影响。 以乳酸脱氢酶释放(LDH)法测NK细胞活性，MTr法测淋巴细胞转化率，流式细胞术检测肿瘤 细胞凋亡、肿瘤细胞的增殖指数及肿瘤细胞p53、Fas、FasL、Caspase-3的表达，RT-FCR法测定荷 瘤小鼠脾细胞IL-2mRNA及IL-12mRNA的表达，探讨抗肿瘤机理。结果：所制备的阿霉素长循 环脂质体具有粒径小、包封率高，鹰蔽型的特点。热敏脂质体还具有对热敏感的，易于释放的特 性。阿霉索脂质体、阿霉素长循环脂质体、阿霉素长循环热敏脂质体对H22荷瘤小鼠肿瘤均有 阿霉索的抑瘤率为35．6％。与游离阿霉素比较，阿霉紊长循环脂质体、阿霉素长循环热敏脂质 体显著延长了荷瘤小鼠的存活时间。HPLC测定结果显示，尾静脉注射给药24小时后，与游离 阿霉素组比较，阿霉素长循环脂质体和阿霉素长循环热敏脂质体组小鼠肿瘤组织和血液中的阿 霉素含量明显上升，而在心、肺中的古量显著降低。组织学观察显示，长循环热敏脂质体引起大 量肿瘤细胞广泛坏死，同时减少对心肌细胞的损伤。肝、脾、肺、肾组织来见明显的异常变化。 测定NK细胞活性结果显示，与盐水对照组(0．2017)和游离阿霉素组(0．1492)比较。阿霉素长 循环脂质体(0．3696)、阿霉素长循环热敏脂质体(0．3795)组NK细胞活性显著增加。MTT法测 定淋巴细胞转化率结果显示阿霉素长循环脂质体、阿霉素长循环热敏脂质体与游离阿霉素比 较，淋巴细胞转化率未见明显提高。RT．PCR结果表明。阿霉素长循环脂质体组与游离阿霉索组 比较，脾细胞IL-2mRNA和IL·12mRNA的表达明显增高，结论：制备阿霉素长循环脂质体及长循 环热敏脂质体，可以使阿霉素在肿瘤局部靶向浓集，有效地杀灭肿瘤细胞，提高化疗药阿霉素的 抗肿瘤效果。同时降低阿霉索在其他脏器组织中的分布，从而降低阿霉素的心肺毒性，并保护 机体的免疫功能。其中长循环热敏脂质体抑瘤效果更明显，并能显著延长荷瘤小鼠的存活时 间。讨论：近年来，有关脂质体包封药物的应用研究非常广泛。抗肿瘤化疗药阿霉素脂质体包 封后，可显著增加药物的抑瘤效果。其原因是由于实体瘤组织中血管增生，形成丰富的血管网， 脂质体可以延长药物在体内的循环时间，增加药物与癌细胞的接触机会，因此可提高对肿瘤的 杀伤效果。阿霉寨长循环脂质体(隐形脂质体)由于其脂质体膜上加有亲水性PEG修饰，可逃 避体内单核细胞吞噬系统的捕获，延长了体内循环时间，增强抑癌效果。热敏脂质体是在脂质 体膜组成中加人一种对热敏感的磷脂，在达到一定温度时，使脂质体膜的状态发生改变，通透性 增加。大量药物得以释放。为此我们制备了长循环热敏脂质体，使药物在血中的循环时间延长。 ·55· 给肿瘤局部加热至4142E，使包封的阿霉素在肿瘤局部释放增加，以达到更好地杀灭肿瘤、保 护机体的免疫功能不受损伤或少受损伤的目的。 关键词 阿霉素脂质体阿霉素长循环热敏脂质体药代动力学 高效液相抗肿瘤 56·