鲐鱼消化道中蛋白酶提取条件地研究.pdfVIP

鲐鱼消化道中蛋白酶提取条件的研究 于国英5，朱莉，韩志武 (青岛大学医学院附属医院，山东青岛266003) 摘要：目的建立从鲐鱼消化道中提取蛋白酶的方法，并探讨提取的最适条件．方法采用乙醇提取． 结果该蛋白酶的提取温度为20C，提取时间为2h，，H为7．5，活化时间为16h，乙醇沉淀浓度 为65％．结论此法简便，准确，适用于鱼类蛋白酶的提取． 关键词：鲸科鲐鱼：消化道；蛋白酶 目前，国内的蛋白水解酶大多来源于家畜的脏器，而鱼类，特别是海洋鱼类消化道中也含有丰 富的蛋白酶【卜4l。国外在这方面已做了大量的研究工作，他们将鱼类消化道作为工业和医药用蛋白酶 的来源之一。本文报道从青岛水产加工量较大的鲭科鲐鱼废弃物消化道中分离提取蛋白酶，并对其 提取过程中的某些因素条件进行比较，丛中筛选并获得提取蛋白酶的最适条件。 1 材料 鲐鱼消化道。青岛水产品加工厂提供。紫外分光光度计，UV-9001日本岛津公司产品。 2方法 2．1鲐鱼消化道蛋白酶的提取 匀浆 25％7．醇在一定的温度、PH下搅拌提取 过滤 洗净的鲐鱼消化———◆ 浆液————————————————◆ 提取液叶 CaCl2(原料量的5％) 静置活化 乙醇沉淀 离心、脱脂 乳液——叶激活乳液————◆沉淀物——————◆蛋白酶粉 O℃～5℃ 低温干燥 2．2蛋白酶活力的测定方法 酶活力的测定采用福林．酚试剂法【6】，依A280nm计算蛋白酶活性。在PH8．0(磷酸氢二钠和磷 酸二氢钠配制的缓冲液)的条件下，30C水浴保温30min,以每l min水解酪蛋白产 g鲜样组织每l 生l心酪氨酸为1个活性单位。 3结果 3．1提取温度对酶活力的影响 实验结果表明(见表1)，在提取时间2 h和沉淀的乙醇浓度为70％等这些 h、pH7．5、活化16 条件相同的情况下，提取温度以20℃为宜。 裹1提取湿度对酶活力的影响 5作者简介：于国英(1954-)，女，山东青岛人，副主任药师。主要从事药剂的研究 332 3．2提取时间对酶活力的影响 h和沉淀的乙醇浓度为70％这些 7．5、活化16 实验结果表明(见表2)，在提取温度20C、pH 条件相同的情况下，提取时间以2h为宜，随提取时间的延长，总活力逐渐下降。 裹2提取时间对酶活力的影响 3．3提取PH对酶活力的影响 h，和沉淀的乙醇浓度为70 h、活化16 实验结果表明(见表3)，在提取温度2012、提取时间2 ％这些条件相同的情况下，提取pH以7．5为宜。 表3提取PH对酶活力的影响 3．4静置活化时间对酶活力的影响 7．5，沉淀的乙醇浓度为70％这 实验结果表明(见表4)，在提取温度20C、提取时间2 h、pH 些条件相同的情况下，静置活化时间以16h为宜。 表4静置活化时间对酶活力的影响 3．5乙醇沉淀浓度对酶活力的影响