无血清培养条件下肿瘤细胞生长地研究.pdfVIP

84 中国癌蛀研究进展@ 无血清培养条件下肿瘤细胞生长的研究 章雄文 胥彬 肿瘤细胞通常用有血清培养液进行体外培养，但血清中的成分复杂，如补体、血液凝集因 子、生长因子及许多未知的物质，且不同厂家的血清其成分亦有差异…o无血清培养技术则 使细胞在消除血清未知因素影响的条件下生长，对于细胞生长因子、单克隆抗体的制备、细胞 分泌产物的研究及观察生长因子对细胞生物学特性的影响，都是一项必不可少的技术。我们 以DMEM和Ham’sF12为基础培养液，加入7种生长因子、激素及营养物质，配制成无血清培 外培养的肿瘤细胞的生长情况。 材将与方法 BILL公司产 品；HEPES。Merck产品；小牛血清，华东理工大学产品；亚硒酸钠、转铁蛋白、表皮生长因子、胰 岛素、地塞米松、三碘甲状腙氨酸和氮兰四唑盐(MaT)，Sigma产品。倒置相差荧光显微镜，日 IvlFGInc公司产品；DG3022酶联免疫检 本Olyanpus公司产品；二氧化碳培养箱，美国Sheldon 测仪，国营华东电子管厂产品。 ， 2．细胞株人肝癌HepG2细胞，系从美国引进，由中国科学院上海生物化学研究所汪垣 物学研究所。 一． 一． 3．大鼠尾胶原制备及使用 尾部切断大鼠鼠尾，置75％酒精提泡30rain，剥皮抽出尾腱， 板每孔滴加胶原50vl，过夜，吸干各孔胶原液，培养液洗涤2次后，即可供细胞接种用o 4．细胞培养基础培养液成分组成见表l。本实验所有细胞均用基础培养液+15％灭活 7种营养因子而成(表2)。细胞接种于预先用鼠尾胶原覆盖过的96孔板中，经常规培养12h 清，48h更换实验所需的不同培养液继续培养一段时间，M，兀、法测定细胞生长情况o。 奉课题受国家自然科学基金项目资助(3957懈24)”1 作者单位：200031上海，中国科学豌上海药物研究所 无血清培养条件下肿瘤细胞生长的研究 裹1基础培养液成分组成 襄2无血清培养液各因子成分组成 成分 浓度 成分 浓度 DMEM 6，7g／L 转铁蛋白 10“g／ml namt$F12 5．3WL 三碘甲状朦氨酸 1．0nlml／L 50 HEPEs 15mind／L 地塞米橙 rlracl／L NaHO五 2．0g／L 维生索C 0．2mngg／L 青霉素 10x104U／L 亚硒酸钠 30ranol几 链霉索 100mg／L 胰岛素 加”g／ml 2．0mind／L 表皮生长因子 10 L谷氨酰胺 rg／n,．1 5．M1T法测定细胞生长[2】细胞于96孔板中培养一定时间后，弃旧液，每孔加新鲜有血 +5％异丁醇+O．12％盐酸)100pl，过夜，第2天用酶联免疫检测仪检测每孔的A540。值。 结 果