对蛴螬高毒力的苏云金杆菌HBF-1菌株对氨基酸需求地研究初报.pdfVIP

第九届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会 湖南师范大学 K沙 2003．1I．8 对蛴螬高毒力的苏云金杆菌HBF一1菌株对氨基酸需求的研究初报+ 冯书亮王容燕曹伟平王金耀范秀华 (河北省农林科学院植物保护研究所保定071000) 摘要：本文初步探讨了对蛴螬高毒力的苏云金杆菌HBF-I菌株对氨基酸的需求。试验结果表明，HBF．I 菌株属于缬氨酸和亮氨酸半营养缺陷型，在缺少精氨酸的培养基中芽孢萌发受到一定抑制，营养细胞增殖 缓慢，进一步的研究表明异亮氨酸的存在抑制了该菌株从丙酮酸合成n-酮基异戊酸的某种酶的活性。 关键词：苏云金杆菌，HBF．I菌株，蛴螬．氨基酸 1 中图分类号：$476．I 文献标识码：A 植物地下部分，具有一定的隐蔽性，而且分布广，为害时间长，为害植物种类多，是世界性的一类 难防治害虫。在我国，蛴螬发生遍及全国各地，发生面积大。许多地区调查表明。蛴螬占地下害虫 总虫量的70—80％以上，为害居首位…。HBF_1菌株是本研究室通过多年的分离筛选获得的苏云金杆 菌(Bac／]]us (Anomala gg／g土”1。该菌株为我国研制开 金龟和铜绿丽金龟幼虫的LC50分别达到18．987ug／g土和34．713 发防治蛴螬的新型Bt杀虫剂提供了具有重要经济价值的菌株资源。 苏云金杆菌在芽孢形成期间产生伴孢晶体蛋白毒素，它是一种蛋白质，起主要的杀虫作用，通 常占细胞干重的30—40％，由十八种氨基酸组成，因此，氮素营养对苏云金杆菌的生长和晶体蛋白毒 索的形成具有特别重要的意义”1。本文探讨了苏云金杆菌HBF一1菌株芽孢萌发和营养细胞增殖对氨 基酸的需求，并对缬氨酸生物合成代谢受阻机制进行了调查。 1材料与方法 1．1供试菌株 苏云金杆菌HBF-1菌株由本研究室从土壤中分离筛选获{导。 1．2培养基 LB培养基(g／L)：多肽蛋白胨109，酵母浸出粉59，NaCI 29，柠檬酸钠19，葡萄糖59，DH7．0。 培养基(g／L)：KzHP04149，l(Ii2P0。69，(NH4)2S0429，Mgs0··7H20 合的氨基酸培养基(细菌过滤器除菌)，以加入20种氨基酸作为全培养基。各种氨基酸的添加量除 L一胱氨酸为0．19／L，L-酪氨酸为0．29／L外，其他各种氨基酸均为0．49／L。 1．3接种源 将供试菌株接种在LB固体斜面培养基上，30℃培养至孢晶分离，用生理盐水洗3次，浓度调至 2×105cfu／ml左右，80X215min热处理，以此作为测定芽孢萌发对氨基酸需求的接种源。 。基金项目：河北省科技攻关项目) 作者简介l冯书亮(1957一)．男．研究员，主要从事生物防泊方面的研究． 冯书亮等：对蛴螬高毒力的苏云金杆菌HBF一1菌株对氨基酸需求的研究初报 心(3000rpm，20min)，收集菌体，用灭菌的生理盐水洗涤3次后配成2X105cfu／ml的菌悬液作为测 定细胞增殖对氮基酸需求的接种源。 1．4芽孢萌发和细胞增殖对氨基酸需求的测定 取芽孢悬液及营养细胞悬液0．2m1分别接种于盛有8ml氨基酸组合培养基的L型试管中，30C， oD，zo值在0．5以上的用“+++”表示。 1．5缬氪酸生物合成代谢受阻机制的调查 之外的19种氨基酸和a一酮基异戊酸。作为培养基B；加入除缬氨酸、亮氨酸及异亮氨酸之外的17 种氨基酸，作为培养基C。取营养细胞悬液0．2m1分别接种于盛有8ml氨基酸组合培养基的L型试 管中，30‘C，水浴振荡培养72h，每隔24h观察一次细胞增殖情况。增殖程度的测定羽1．4。 2 结果与分析 裹1 HBF-1菌株芽胞萌发和营养细胞增殖对氨基酸需求的溯定 2．1 HBF-1菌株对氨基酸的需求 在20种氨基酸组成的全培养基中， HBF-1菌株的芽孢迅速萌发，营养细胞 生长发育正常，增殖迅速。HBF一1菌株 的营养细胞在缺少缬氨酸