实验性肝纤维化大鼠肝组织结缔组织生长因子动态变化及其意义.pdf

中文摘要 实验性肝纤维化大鼠肝组织结缔组织生长因子 动态变化及其意义 摘 要 H的：肝纤维化作为各种慢性肝病共有的渐进性病理改 变f幔重威胁着人类的健康。其主要特征表现为以胶原为主要 成分的细胞外基质(extra—celIularmatri×，EcM)合成增多、降 解相对不足而过量沉积。肝纤维化的形成是一个涉及多因 素、多细胞参与的复杂过程，其中细胞因予网络始终是人们 的研究热，量。转化生长l列子pl(TGF—p1)足作用明确的早期致 tissue 纤维化细胞因子，而结缔组织生长I因子fconnective 2ro、vthfactor’cTGF)是一种新发现的细胞因子，被视为 TGF—D。的下游反应元件，具有促进成纤维细胞增殖以及参与 细胞外基质(EcM)产：生、积聚等功能。国内外有关肝纤维化 的体内和体外实验研究表明肝脏星状细胞激活是肝纤维化 发病机制的中心环节，而且cTGF对肝星状细胞的分化增殖 具有很强的调控作用，CTGF的异常高表达在肝纤维化的发 生、发展过程中起着关键作用，已成为肝纤维化新的研究热 点。但目前有关CTGF在肝脏纤维化方面的研究，国外多为 细胞培养及临床研究如：原发性胆汁性肝硬化(PBc)及胆道 闭锁、肝硬化、肝癌、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、特发性 门静脉高压症等，国内则以单一实验方法洲定四氯化碳所致 化学性肝损伤模型居多，本实验旨在采用尾静脉注射人血白 蛋白法复制免疫性肝纤维化模型并通过免疫组织化学方法 中文摘要 tissLle 平，动态观察盯组织r№古缔组织牛艮冈子(connective growth 病机制rI，的作用与地位，为肝纤维化的防治提供理沦依据。 方法：l研究对象：雄性清洁级wistar人鼠48』l，体重 组以尾静脉注射人血白蛋白法造模，免疫灞导阶段：人血白 蛋白稀释后与等量不完企福氏佐剂乳化，于大鼠腹股沟皮下 多点注射致敏，每次注射O．5ml(内含白蛋白4mg)，共四次， 前两次致敏问隔14人，后两次间隔10天。免疫攻击阶段： 末次致敏1O天后尾静脉攻击注射人【fI：l启蛋白，2次／周，第l 量2个月，免疫攻击12周n、j1大鼠肝纤维化形成。对照组以 等量生理盐水处理。2标本的采集和保存：于造模过程的免 疫攻击阶段第0、】、2、4、6、8、10、12周分别取4只模 型组和2只正常组大鼠行股静脉放血处死后立即剖腹取肝 脏，取适量肝组织经10％中性甲醛溶液固定，余经液氨速冻 后置．84℃冰箱保存备用。3肝组织标本进行常规HE染色、 苦味酸一天狼猩红染色，显微镜F观察炎症、坏死及纤维化 的形成与发展，参照2000年全围第十次病毒性肝炎及肝病 学术会议制订的《病毒性肝炎防治方案》中关于炎症活动度 分级和纤维化程度分期的标准。C下GF的免疫组织化学染色 结果采用图像分析系统测定，以cTGF表达阳性区域占全视 野面积的百分比表示其含量，取其平均值。4逆转录．聚合酶 中文摘要 相对表达水、f。5统计学处理采用sPsS11．5版统计软件。 结果：¨汗组织HE染色、天狼星红染色与cTGF免疫组 织化学染色观察结果：模型组大鼠肝组织呵见炎症、坏死及 纤维化的发生、发展，IE常对照组无此现象。CTGF染色阳 性物质呈棕黄色，『5}I性染色部位主要为汇管区、纤维间隔及 与肝实质的交界处、近纤维间隔的肝窦细胞中。模型组大鼠 肝组织Ⅲ性物质呈弥漫性表达，且随造模时问延长而逐渐加 ；_；|{，肝细胞始终为阴性。正常对照组未见阶陆物质。2随着 逐渐增高，且sI组、s2组、s3组、s4组与so组比较及四者 之问两两比较均有显著性差异(pO．05)。3随着肝组织炎症坏 死的加重，从G。到G。cTGF及其mRNA表达逐渐增高，且 之问及G。组与G3组之间则无显著性差异(p0．05)。4肝组织 CTGF免疫组化与逆转录一多聚酶链反应结果呈正相关 (p0．05)。 结论：l尾静脉注射人血白蛋白法可成功制造免疫性肝 纤维化模型，肝组织具有慢性病