HKC细胞损伤对草酸钙晶体成核和聚集的促进作用.pdfVIP

V01．32 高等学校化学学报 No．2 CHEMICALJOURNALOFCHINESE 236—240 2011年2月 UNIVERSITIES HKC细胞损伤对草酸钙晶体 成核和聚集的促进作用 姚秀琼，邓穗平，欧阳健明 (暨南大学化学系，生物矿化与结石病防治研究所，广州510632) 摘要采用H：0：对人肾小管上皮细胞(HKC)进行损伤．HKC细胞受损伤后，其活力降低，并表达骨桥蛋白 (OPN)．损伤细胞促进草酸钙晶体的成核、聚集，并促进一水合草酸钙(COM)晶体的形成，但对晶体生长的 促进作用不明显．本文研究结果表明，HKC细胞损伤后增加了肾结石形成的危险性． 关键词草酸钙；细胞调控；骨桥蛋白；生物矿化；HKC细胞 中图分类号0614．2 文献标识码A 文章编号0251-0790{2011)02-0236-05 肾结石是生物体内病理矿化的产物，80％以上为草酸钙(CaOxa)结石¨∞]．从化学的观点看，肾结 石形成至少与3个因素密切相关口．4 剂浓度或活性降低，促进剂浓度增加；(3)肾小管上皮细胞(HKC)膜的氧化性损伤．HKC受损伤后， 细胞膜表面不但能为初始晶体的异质成核提供有效位点，而且增强了细胞膜与矿物的黏附，从而增加 了肾结石形成的危险性口J． 从分子和超分子水平上分析，HKC受损伤以至凋亡时，细胞膜的非对称性会发生变化，细胞膜中 磷脂酰丝氨酸(PS)外翻∞J，并表达透明质酸等功能分子，这些带负电荷的分子可以通过静电作用结合 带正电荷的尿晶体[如一水合草酸钙(COM)和羟基磷灰石]．实验表明，动物的肾小管上皮细胞受损伤 后，鸟粪石的附着力可增加5—6倍，而COM晶体的黏附量最大可增加20倍J． 然而，对受损伤HKC表面结石矿物成核、生长和黏附过程中涉及的静电作用、空间匹配、矿物与 膜表面的黏附力等问题目前尚不清楚捧卅刚；除透明质酸外，对HKC损伤后膜表面其它可能表达的功 能分子特别是含酸性基团的分子和蛋白质的研究还很少¨u；对这些功能分子调控CaOxa晶体成核、生 长和聚集的分子机理尚不清楚． 基于此，本文采用人HKC细胞作为研究肾结石病理机制的细胞模型，期望在分子水平上进一步研 机制． 1实验部分 1．1材料与仪器 人肾近端肾小管上皮细胞系(HKC)来源于上海长征医院，由暨南大学医学院蒋建伟副教授惠赠． 司)，链霉素(大连美罗大药厂)，细胞增殖分析试剂盒(CCK-8，日本同仁化学研究所)．其它常规试剂 均为分析纯． 在Satire2酶标仪(瑞士Tecan公司)上测量细胞吸光度值，测试波长450 nm．XL-30型环境扫描电 MetaDuoScan 激光共聚焦荧光显微镜(德国CarlZeiss公司)． 收稿日期：2010-05．10． 基金项目：国家自然科学基金(批准号资助． 联系人简介；欧阳健明，男，博士，教授，博士生导师，主要从事生物矿化和纳米技术研究．E-mail：仰,yjm@jnu．edu．cn 万方数据 No．2 姚秀琼等：HKC细胞损伤对草酸钙晶体成核和聚集的促进作用 1．2细胞培养、损伤和检测 HKC用含10％新生牛血清的DMEM—F12培养液培养，同时加入100 U／mL青霉素、100斗g／mL链 霉素．培养条件为3792，5％CO：，饱和湿度．HKC传代采用胰蛋白酶消化法．细胞达80％融合后用 37℃的D—Hanks平衡液洗涤2次，加入0．25％胰酶消化液，在37℃放置3～5min后在倒置显微镜下 观察消化程度．当细胞变圆及细胞之间出现空隙且不再连接成片时，表明细胞消化适度，此时加入 10％新生牛血清的DMEM—F12培养液以终