人股骨头骨坏死骨微观结构及成、破骨细胞活性的区域性分布特征.pdfVIP

第六届《中华骨科杂志》论坛·关节外科 人股骨头骨坏死骨微观结构及成、破骨细胞活性 的区域性分布特征 王程徐小龙 袁雪凌苟文隆 彭江卢世璧 北京，中国人民解放军总医院骨科研究所 【摘要】目的：对人股骨头骨坏死标本不同区域的骨微观结构以及成、破骨细胞活性进行分析比较。方法：收 集我院2011年至2013年非创伤性股骨头骨坏死病人行全髋关节置换术后的股骨头标本10例(FicatIV期)，其中男 性6例，女性4例，年龄40．57岁。将所获得标本按照病理学表现分为软骨下骨区、坏死区、硬化区、健康区，然后 通过Micro．CT、纳米压痕、实时荧光定量PCR、免疫组化染色等方法对不同区域的骨微观结构以及成、破骨细胞活 性进行评价。结果：(1)股骨头骨坏死不同区域的骨小梁排列及结构特征存在差异。(2)坏死区和健康区骨小梁的 弹性模量和硬度无显著差异(Po．05)。(3)软骨下骨区和坏死区可见TRAP染色阳性细胞，硬化区以及健康区未见 骨区及坏死区呈阳性表达，其余区域为阴性。 结论股骨头骨坏死塌陷过程中。坏死区骨小梁微观力学强度相比健 康区没有显著降低，而骨微观结构发生明显改变。软骨下骨区及坏死区破骨细胞活性增强，硬化区成骨细胞活性增 强，成、破骨细胞活性改变可能是造成股骨头宏观力学降低的原因。 【关键词】骨坏死；股骨头：力学强度；Micr0．cT；纳米压痕： ofthefemoral 股骨头骨坏死(osteonecrosis head，0NFH)是骨科常见的难治性疾病，非创伤性股 骨头坏死高发于中青年患者(30．50岁)。该病自然进展快，致残率高。它是由多种病因造成股骨头血 液循环中断或受损，导致股骨头内骨细胞、骨髓造血细胞等活力成分发生不同程度地死亡，在坏死 与修复同时作用下，股骨头坏死区的宏观力学强度逐渐下降，继而导致股骨头塌陷，最终发展为严 重的髋关节骨性关节炎，然而目前对股骨头骨坏死的机制仍然不甚清楚Il21。 本研究中，我们通过病理、免疫组化染色、Trap染色、实时荧光定量PCR、Micro．CT等方法， 分别检测股骨头骨坏死样本不同区域骨微观结构的改变，骨小梁微观力学强度及成、破骨细胞活性 的改变，探索股骨头骨坏死股骨头塌陷机制。我们认为股骨头骨坏死不同区域的骨微观结构存在显 著差异。软骨下骨区和坏死区的破骨细胞活性增强，出现骨质吸收；硬化区成骨细胞活性增强。我 们认为股骨头骨坏死修复过程中，成、破骨细胞活性发生改变，进而导致宏观力学强度减低，在持 续的力学载荷作用下，最终导致股骨头塌陷。 材料与方法 一、材料： 1．实验材料 收集我院2011年至2013年期间因非创伤性股骨头骨坏死病人行全髋关节置换术后的股骨头标 本10个(FicatⅣ期)以及病人病历和临床影像学资料 251 第六届《中华骨科杂志》论坛·关节外科 5000BUEHLER Locus加拿大)，硬组织切片机(IsoMet⑩ 2．仪器设备：Micro．cT(GEexplore n’Vac1000 BuEHLER公 公司美国)，包埋机(Cast BuEHLER公司美国)，磨片机(MetaSeⅣ⑩ 司美国)，实时荧光定量PCR仪(ABI 公司)。 二、方法 1．标本准备 将收集的新鲜股骨头骨坏死标本经M硫o．CT扫描之后，进行切割处理(图1)，A、B部分经4％ 多聚甲醛固定2周后，做病理学处理。C部分按照其病理表现切分为四个区域(软骨下骨区，坏死 区，硬化区，健康区)后，一80℃保存，留备进行RT-PCR检测。 图1将股骨头骨坏死标本切割为3部分，A部分做不脱钙硬组织切片处理以及纳米压痕实验，B部分做石蜡病理切片处理，C部分做实 时定量PcR检测(图a，b)我们用铁丝沿股骨头冠状位做环状标记，保证所有标本处理方法的相似性(图c，d)