棕色固氮菌固氮酶催化N-%2c2-和H-%27%2b-还原机制研究.pdf

中文摘要 生物固氮主要是由钼铁固氮酶催化，固氮酶由铝铁蛋白和铁蛋白两个组分组成。在固氮酶的 和还原的确切位点尚未确定．此外，在固氮酶反应计量式中，每合成一分子氨究竟释放几分子氢 气也无定论。在本论文中，通过定点突变棕色固氮菌固氮酶FeMo-co附近关键氨基酸和高柠檬酸， 分析突变固氮酶催化N2和II+还原能力的变化，就固氮酶FeMo-co上的底物还原位点和电子传递通 路两个问题展开讨论，探索固氮酶的催化反应机制。 的突变株和野生型菌株分别发酵培养，利用柱层析，凝胶过滤层析和制备电泳纯化其钼铁蛋白和 铁蛋白．分析比较野生型和突变株固氮酶对N2、Il+和QH2还原活性的变化。 通过分析突变株固氮酶催化底物还原活性特征发现：a-195“突变后几乎丧失固氮活性，而 对总电子流没有影响；a-191。或高柠檬酸发生改变对总电子流影响很大。结合固氮酶三维结构 酸的长臂进入钼位，n∥发生突变后，高柠檬酸的长臂变短。电子从长臂进入铝位的通路阻断， 表现出总电子流下降；a-191。在电子传递链上起着枢纽的作用，它和a-195“形成氢键，也可以 a-195“进入铁位。 原子上形成铁氢化物时置换放氢，此处的放氢反应依赖于N2，对CO敏感。钼原子是一个独立的 ∞螺旋或多个氨基酸残基介导，通过高柠檬酸的长臂进入FeMo．∞上的钼原子。 关键词：棕色固氮菌，固氮酶，电子传递，催化机制 Abstract fixationis the whichconsists Biologicalnitrogen mainlycatalyzedby Mo-dependantnitrogenase two andFe of components：MoFe arethetwo protein protein protein．Dinitrogen(N2)and proton(rr3 substratesfor itiswellknownthat arereduced physiological nitroganase．and they ontheFcMo-eoof theexactsitesfortheirreductionarestilluncertain．In overall dinitroganase,but addition,the stoichiometricof isalsonotascertained．Oneunresolvedisthe equationnitrogenase major problem ratioof evolved reduced．Inthis several He N2 mutantsinwhichsome per dissertion,byconstructing residuesor／and acidaroundtheFeMo--eohadbeen important organic the and replaced,and N2 analyzing ofthesealtered mechanisticdetailsof willbe 旷catalyticproperties d