喹硫平对小鼠脑缺血后胶质增生及IL1β表达的影响及其作用机制_临床医学论文.docVIP

喹硫平对小鼠脑缺血后胶质增生及IL表达的影响及其作用机制_临床医学论文 喹硫平对小鼠脑缺血后胶质增生及IL表达的影响及其作用机制_临床医学论文 作者：房绍宽 白晶 周春奎 吴江 【摘要】 目的 研究喹硫平对小鼠脑缺血后胶质增生及白介素(IL)表达的影响及其作用机制。方法 小鼠分为假手术组、药物对照组、缺血组、药物保护组;采用激光共聚焦显微镜方法观察脑缺血后胶质增生及IL表达情况;采用Western印迹方法检测脑缺血后核因子(NF)及 p65蛋白的表达。结果 缺血组与假手术组比较GFAP共表达阳性细胞(黄色)数量明显增加(0.01);药物保护组与缺血组比较GFAP共表达细胞(黄色)数量明显减少(0.01)。缺血组与假手术组比较NF蛋白表达量增加(0.05);药物保护组与缺血组比较NF蛋白表达量减少(0.05)。缺血组与假手术组比较NF蛋白表达量增加(0.05);药物保护组与缺血组比较NF蛋白表达量减少(0.05)。结论 喹硫平能够减轻小鼠脑缺血后胶质增生及IL表达，其机制可能和调节NF的活性有关。 【关键词】 喹硫平;核因子 　 脑缺血的临床表现不仅包括运动、感觉、视觉功能障碍，也包括遗忘、忽略等，而且常伴有情绪紊乱、抑郁焦虑及精神症状，这些均抑制脑缺血后生理和认知功能的恢复〔1,2〕。近几年，很多证据表明一些非典型抗精神失常药具有神经保护作用。本研究以小鼠脑缺血为模型研究非典型抗精神病药喹硫平是否对脑缺血具有保护作用，探讨喹硫平对脑缺血后胶质细胞增生及白细胞介素表达的影响及其机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 雄性ICR小鼠48只，重量18～20 g，正常饮食和光照时间，室温下饲养。 　　1.2 动物模型制备 用氯胺酮(110 mg/kg)和甲苯噻嗪(15 mg/kg)麻醉，麻醉后沿腹正中线切口，分离双侧颈总动脉并用棉线阻断双侧颈总动脉血流60 min，之后撤掉棉线观察血液复流，然后缝合腹正中线切口。假手术组执行相同程序，但不闭塞双侧的颈总动脉。手术后用热毯维持小鼠在正常体温。 　　1.3 给药方法 喹硫平溶于无菌生理盐水中，参照实验方法〔3,4〕，采用喹硫平10 mg/kg，缺血手术后给予小鼠喹硫平10 mg/kg或生理盐水腹腔注射，1次/d，共4 w。 　　1.4 分组 实验动物分为4组：脑缺血组闭塞双侧的颈总动脉然后给予生理盐水腹腔注射;假手术组执行假手术然后给予生理盐水腹腔注射;药物对照组执行假手术然后给予喹硫平10 mg/kg腹腔注射;药物保护组闭塞双侧的颈总动脉然后给予喹硫平10 mg/kg腹腔注射，每组小鼠12只。 　　1.5 方法 　　1.5.1 激光共聚焦显微镜检测神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)共表达 将组织切片在二甲苯中浸3次，正常山羊血清封闭，分别滴加50 μl的1∶1混合的兔抗大鼠GFAP(1∶100)和小鼠抗大鼠IL，设空白对照〔无一抗，加磷酸盐缓冲液(PBS)〕和抗体特异性对照(加一抗不加二抗，加二抗不加一抗)，所有切片同时染色。切片一抗及二抗加入后，置于湿盒内，4℃过夜。激光共聚焦显微镜观察。 　　1.5.2 蛋白质印迹(Western印迹)检测各组核转录因子和p65蛋白表达 取海马组织匀浆，然后用凝胶加样缓冲液重悬，沸水浴中加热10 min。蛋白定量后，用同一蛋白含量上样跑十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS，然后转移到尼龙膜上，封闭液封闭，加入含有一抗(兔抗NF和p65特异性抗体)的3 ml反应液，4℃温育2 h,然后加入含有二抗(羊抗兔IgG)的3 ml反应液，显色拍照。 　　1.6 统计学分析 采用SPSS13.0软件，计量资料以x±s表示，采用两因素方差分析比较各组间的差异，然后进行t检验。 　　2 结 果 　　图1 缺血再灌注后4 w GFAP海马齿状 　　回区激光共聚焦显微镜观察(×400) 缺血组与假手术组比较，GFAP共表达阳性细胞(黄色)数量明显增加(0.01);药物保护组与缺血组比较GFAP共表达阳性细胞(黄色)数量明显减少(0.01)。见图1。缺血组与假手术组比较p65蛋白表达量增加(0.05);药物保护组与缺血组比较p65蛋白表达量减少(0.05)。见图2。缺血组与假手术组比较p50蛋白表达量增加(0.05);药物保护组与缺血组比较p50蛋白表达量减少(0.05)。见图3。 3 讨 论 　　非典型抗精神失常药物具有神经保护作用，其中非典型抗精神失常药喹硫平可有效缓解N甲基苯基吡啶(MPP+)、H2O2及β淀粉样肽等由于氧化应激所诱导的嗜铬细胞瘤(PC12)细胞死亡〔5,6〕。这些神经保护作用的机制包括影响Bax/Bcl的转位和表达或超氧化物歧化酶(SOD)的上调〔5，7〕。动物实验表明喹硫平能有效缓解慢性应激导致的海马脑源性神经营养因子(BDNF)