大鼠碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）酶联免疫检测.doc

大鼠碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）酶联免疫盒使用说明书使用前阅读。酶联免疫试剂盒是基于夹心只能用于研究用途不得用于医学诊断。用途：用于工作原理是夹心酶联免疫吸附法ELISA）测定预先包被bFGF抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：48ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 链霉亲和素-HRP 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 生物素标记的抗bFGF抗体 0.5ml×1瓶 1 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存 需要而未提供的试剂和器材℃恒温箱。 标准规格酶标仪。 一次性试管注意事项 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将洗涤液至少ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中-20℃保存，但应避免反复冻融g/L 5号标准品 120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液 12 ng/L 4号标准品 120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液 6 ng/L 3号标准品 120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液 3 ng/L 2号标准品 120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液 1.5 ng/L 1号标准品 120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液 根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 加样：1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗bFGF抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂AB和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加)；3）代测样品孔：加入样本40ul，然后各加入抗bFGF抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育60分钟。 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。 操作程序总结： 检测范围：1ng/L→24 ng/L。 保存：2-8℃。 有效期：6个月(2-8℃)。 Rat basic fibroblast growth factor (bFGF) ELISA Kit Instruction This kit is only for scientific research, and shall not be used as a clinical diagnosis of use. Purpose This kit allows for the determination of bFGF concentrations in Rat serum, cell culture supernatant, and other biological fluids. Principle The kit assay Rat bFGF level in the sample，add bFGF antibody to microtiter plate wells, after Incubating,ad