多发性骨髓瘤MMSA1抗原的二级结构预测及多克隆抗体的制备_临床医学论文.docVIP

多发性骨髓瘤MMSA抗原的二级结构预测及多克隆抗体的制备_临床医学论文 多发性骨髓瘤MMSA抗原的二级结构预测及多克隆抗体的制备_临床医学论文 作者：周芙玲，张王刚，王佰言，张鹏宇，古流芳，张文娟，蒙昕，田纬 【摘要】 目的 运用生物信息学技术研究人多发性骨髓瘤MMSA基因表达蛋白的二级结构和B细胞抗原表位，并制备多克隆抗体。方法 应用DNAStar Protean软件提供的模块分析和预测MMSA蛋白的二级结构和B细胞抗原表位。采用多通道同步固相全自动合成系统合成15肽，免疫健康新西兰成年家兔，制备相应的多克隆抗体。结果 MMSA蛋白含有较多的β折叠和转角结构。综合柔韧性、亲水性、抗原性、表面可能性、二级结构、偶联难易及实验难度等因素，选取了MMSA蛋白序列318～333位作为抗原表位，即SSSLLPQSPAPTEHL，15肽合成产物经HPLC纯化和质谱检测，纯度达到98.65%，序列正确。免疫兔子获得血清抗体采用层析柱纯化，ELISA检测效价：1∶6000。结论 本研究为基于人MMSA抗原表位手段的免疫治疗研究提供了理论依据。 【关键词】 多发性骨髓瘤;MMSA二级结构;抗原表位;多克隆抗体 ABSTRACT: Objective Prediction was made for a novel antigen (multiple myeloma special antigen) MMSAres and adjuvants. Methods The secondary structure and B cell epitopes of MMSA1 protein were determined by graphic analysis using the Protean module (DNAstar Inc.). Antigenic peptides were synthesized as the antigen with Fmoc/PyBOP method. Adult New Zealand rabbits were immunized by injecting the chemical coupling of synthetic peptidesKLH to obtain antibody. Results MMSA1 protein contained more β sheet and turn regions. Antigenic peptides (SSSLLPQSPAPTEHL) were purified above 98.65% by high performance liquid chromatography and validated by mass spectrometric detection. The immunized sera analyzed with ELISA were 1∶6000 after purification using a peptide affinity column. Conclusion The prediction of tumor antigens provides thereotical evidence for the immunotherapy of multiple myeloma. Moreover, antibody preparation is useful for further study. 　　KEY WORDS: multiple myeloma; MMSA1; secondary structure; epitope; polyclonal antibody 多发性骨髓瘤是一种克隆增殖型浆细胞疾病，虽然常规的化疗、反应停、高剂量化疗后给予造血干细胞移植等方案使患者的缓解率和无病生存期明显提高，但最终难免复发，平均生存期仍仅有3～4年。近年来，肿瘤分子免疫学的快速发展为其治疗开辟了新途径，尤其是特异性抗原在肿瘤的免疫治疗中显示出重要作用[1]。鉴于此，本文拟深入研究前期实验中采用SEREX技术筛选获得的多发性骨髓瘤新抗原MMSA，为深入开展其表位生物学研究、探索其抗原表位的位置、寻找其特征性结构位点，我们运用生物信息学技术对其结构蛋白的二级结构和B细胞抗原表位进行分析和预测，制备多克隆抗体，从而为基于人MMSA抗原表位手段的免疫治疗研究提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 人MMSA蛋白二级结构的预测 人MMSA蛋白氨基酸序列(由基因序列推导)共有364个氨基酸残基，分子质量40.9ku，理论等电点8.12。应用DNAStar Protean软件提供的模块，采用Garnier方法通过计算特定氨基酸残基在特定结构内部的可能性来预