复方斑蝥注射液对荷肝癌H22瘤小鼠的免疫调节作用_临床医学论文.docVIP

复方斑蝥注射液对荷肝癌H22瘤小鼠的免疫调节作用_临床医学论文 复方斑蝥注射液对荷肝癌H22瘤小鼠的免疫调节作用_临床医学论文 作者：张建武，杨颖，曾云，张贵林 【摘要】 目的：研究复方斑蝥注射液（Compound traditional Chinese of cantharis injection，CCI）对荷肝癌H22瘤小鼠免疫调节作用。方法：用2，4二硝基氯苯（2,4，DNCB）诱导荷肝癌H22小鼠皮肤迟发性超敏反应（Delay type hypersensitivity，DTH），观察CCI对小鼠耳廓肿胀度、胸腺指数和脾脏指数的影响；用放免法检测该药对荷肝癌H22小鼠血清白介素2（Interleukin，IL）和肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor，TNF）水平的影响。结果：与空白对照组比，模型组小鼠耳廓肿胀度、胸腺指数和脾脏指数、IL和TNF水平均明显降低，差异显著（P＜0.05）；与模型组比较，CCI可使荷肝癌H22小鼠降低的耳廓肿胀度、胸腺指数和脾脏指数、IL和TNF水平明显增高(P＜0.05）。结论：CCI可提高荷肝癌H22小鼠免疫功能。 【关键词】 复方斑蝥注射液；免疫调节作用；DTH；IL；TNF 近年来，癌症发病率逐年增加，成为当前危害人类健康的重要疾病之一[1]。复方斑蝥注射液商品名艾迪注射液[2]，是应用现代科学方法将方药中所含抗肿瘤及免疫活性物质提纯制成的静脉注射液[3]，经临床应用对消化道、呼吸道及生殖系统肿瘤有明显疗效[4]。本实验研究了CCI对荷肝癌H22瘤小鼠的免疫调节作用，初步探讨了CCI抗肿瘤作用机制。 1 材料和方法 1.1 实验动物健康清洁级（SPF）昆明小鼠120只，体重18g～22g，雌雄各半，由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK（黔）2002－0001。 1.2 实验药物、试剂及配制CCI由贵州益佰制药股份有限公司生产，规格：每支10ml，每1ml相当于0.603g生药，批号：051215；5：上海旭东海普药业有限公司生产，批号：030405；丙酮：南京化学试剂厂生产，批号DNCB：北京市兴津化工厂生产，批号临用前新鲜配制成5% DNCB丙酮液和1% DNCB丙酮液；TNF放射免疫测定试剂盒和IL放射免疫测定试剂盒：天津九鼎医学生物工程有限公司生产。 1.3 主要仪器和器材电子天平（梅特勒托利多仪器有限公司），TDL离心机（湖南星科设备厂），125I放免测定仪（北京核仪器厂）。 1.4 肿瘤细胞株及其来源小鼠H22肉瘤由中科院上海细胞研究所提供。 1.5 实验方法 1.5.1 CCI对荷肝癌H22小鼠耳廓肿胀度、胸腺指数和脾脏指数的影响[5] ①荷肝癌H22小鼠模型复制及分组：昆明种小鼠60只,雌雄各半，在无菌条件下取生长8天的小鼠移植型肝癌H22腹水，用NS稀释调整瘤细胞数为每毫升1×107的细胞悬液，取其中50只小鼠,右腋皮下接种瘤细胞悬液每只0.2ml，造成荷瘤动物模型。然后于全部小鼠腹部去毛，范围约3cm×3cm，将5%DNCB丙酮液每只0.1ml均匀涂抹致敏，24小时后按体重随机分为6组：空白对照组(等容积NS)、模型组(等容积NS)、5组(0.02g·kg-1)、CCI高剂量组(9.45g·kg-1)、CCI中剂量组(4.72g·kg-1)、CCI低剂量组(2.36g·kg-1)，每组10只，每日腹腔给药1次，每次0.15ml·10g-1体重，连续10天。②DTH的产生与测定：末次给药后每鼠左耳用1% DNCB丙酮液0.02ml进行涂布攻击，右耳作对照，24小时后脱颈处死小鼠，称体重，剪下两耳，用内径6mm打孔器同部位取耳片,电子天平称重。以左右耳片的重量差作为肿胀度，比较各组间差异。同时取胸腺、脾脏称重，计算胸腺指数和脾指数。 胸腺或脾指数＝胸腺（或脾脏）重量（mg）/体重（g） 1.5.2 CCI对荷肝癌H22小鼠血清IL和TNF水平的影响 ①荷肝癌H22小鼠模型复制及分组：昆明种小鼠60只，雌雄各半，无菌条件下取生长8天的小鼠移植型肝癌H22腹水，用NS稀释调整瘤细胞数为每毫升1×107的细胞悬液，取其中50只小鼠，右腋皮下接种瘤细胞悬液每只0.2ml，24小时后按体重随机分为6组：空白对照组(等容积NS)，模型组(等容积NS)、5组(0.02g·kg-1)、CCI高剂量组(9.45g·kg-1)、CCI中剂量组(4.72g·kg-1)、CCI低剂量组(2.36g·kg-1)，每组10只，每日腹腔给药1次，每次0.15ml·10g-1体重，连续7天。②放免法测定血清IL和TNF的含量：末次给药后24小时摘除小鼠眼球取血分离血清，按试剂盒说明用放免法测定血清IL和TNF