大鼠IgE依赖组胺释放因子基因的克隆表达及其功能研究_临床医学论文.docVIP

大鼠IgE依赖组胺释放因子基因的克隆表达及其功能研究_临床医学论文 大鼠IgE依赖组胺释放因子基因的克隆表达及其功能研究_临床医学论文 作者：陈晓湘, 胡旭初, 徐劲, 郑南才, 余新炳 【摘要】 　　目的: 获得原核表达的可溶性大鼠IgE依赖组胺释放因子（rHRF）, 并检测其诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能。方法: 克隆Wistar大鼠rHRF基因完整编码区序列并在BL21细胞中进行原核表达, 纯化的可溶性重组rHRF刺激卵清蛋白变应原致敏的大鼠肺肥大细胞, 利用荧光分光光度法测定组胺释放量。结果: 测序证实克隆基因与GenBank中大鼠IgE依赖组胺释放因子（又称翻译控制肿瘤蛋白）mRNA序列的一致性为97%, 推测的氨基酸序列一致性为95%。SDS显示重组rHRF相对分子质量（Mr）约为24000; 重组rHRF诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺不依赖变应原, 且呈剂量依赖关系。 结论: rHRF具有不依赖变应原诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能, 可能在Ⅰ型超敏反应过程中发挥重要作用, 为进一步研究rHRF的免疫学功能打下基础。 【关键词】 大鼠 IgE依赖组胺释放因子 基因克隆 原核表达 肥大细胞 组胺 　　[Abstract] AIM: To clone and express the gene encoding rat IgEin BL21 cells. The soluble recombinant rHRF was purified. Aliquots of the mast cells obtained from the lungs of OVAimmunized rats were separately stimulated by recombinant rHRF at different concentration. The released histamine was measured by the OPT spectrofluorometric procedure. RESULTS: The cloned DNA fragment showed 97% nucleotide sequence identity and 95% deduced amino acid sequence identity with the mRNA of rat IgEdependent histaminereleasing factor (or translationally controlled tumor protein) in GenBank. The recombinant rHRF showed a Mr of 24 000 in SDSPAGE. The purified rHRF which was independent of the allergen induced histamine releasing from the sensitized mast cells in a dosedependent manner. CONCLUSION: The recombinant rHRF, which showed the effect of inducing histamine release from sensitized mast cells, would play an important role in the allergen diseases. 　　[Keywords]rat; IgE 　　组胺释放因子是一大类具有促进肥大细胞和嗜碱性粒细胞释放组胺等介质的生物活性物质的总称。根据发挥作用时对IgE依赖与否, 可分为IgE非依赖性和IgE依赖性两类。1995年MacDonald等[1]从人巨噬细胞系U937培养上清中鉴定出一种IgE依赖组胺释放因子, 并证实其与人的翻译控制肿瘤蛋白（translationally controlled tumor protein, TCTP）为同一蛋白, 与小鼠TCTP氨基酸序列具有94%同源性。IgE依赖组胺释放因子可促进嗜碱性粒细胞释放组胺、 IL、 IL促进B细胞增殖和分泌免疫球蛋白[3]; 促进嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞释放IL同时发挥嗜酸性粒细胞趋化因子作用[4], 引起局部炎症细胞聚集。因此认为该蛋白在Ⅰ型变态反应过程中发挥重要调节作用。肥大细胞是Ⅰ型超敏反应的关键效应细胞, 激活后释放组胺等多种介质。关于IgE依赖组胺释放因子对肥大细胞的作用未见报道。本研究旨在获得大鼠IgE依赖组胺释放因子（rat IgE）重组蛋白, 观察其诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能, 为以大鼠为模型进一步探讨IgE依赖组胺释放因子在Ⅰ型超敏反应发生过程中的作