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大鼠三叉神经痛模型的建立_临床医学论文 大鼠三叉神经痛模型的建立_临床医学论文 【摘要】 目的：建立类似人类原发性三叉神经痛的大鼠模型。方法：雄性SD大鼠在YZ20同光路手术显微镜直视下用铬肠线结扎眶下神经达到局部压迫的效果，术后两周行行为学观察并测量各组疼痛反应阈值，术后10周行病理形态学检查。结果：结扎眶下神经约两周后，大鼠对疼痛刺激反应的敏感性增加，疼痛反应阈值模型组与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）；其病理表现类似人类三叉神经痛的神经病变脱髓鞘改变。结论：对大鼠三叉神经根慢性压迫性损伤可造成三叉神经痛样大鼠模型，其病理表现为三叉神经根的脱髓鞘改变，三叉神经半月节细胞未见明显异常改变。 【关键词】 三叉神经痛 动物模型 脱髓鞘改变 大鼠 原发性三叉神经痛是老年人群中常见病、多发病。随着人口老龄化倾向，该病的发病率有增高趋势。目前治疗三叉神经痛的手术方法很多，但多为破坏性治疗，且疗效不能令人满意。因此有必要建立一个可靠的大鼠三叉神经痛模型，以便进一步了解和研究三叉神经痛的发病过程及治疗方法。尽管目前三叉神经痛的发病机理学说众多，但比较公认且有纤维解剖学证据的是微血管压迫学说［1］，本实验模型正是以此学说为基础建立的。 1 材料和方法 1.1 实验动物 选择健康成年雄性Sprague大白鼠18只，体重200 220 g。18只大鼠随机分为模型组、手术对照组和正常对照组3组，每组6只，模型组行眶内结扎大鼠眶下神经，手术对照组只暴露不结扎。 1.2 模型建立 2%戊巴比妥钠对大鼠进行腹腔内注射（40 mg·kg-1）麻醉。大鼠取俯卧位，8%硫化钠溶液脱毛,3%的碘伏消毒，铺无菌巾。手术是在YZ20同光路手术显微镜直视下完成的。作头顶部中线直切口，显露额骨和鼻骨,暴露眼眶，可见眼眶的边界由上额骨、额骨、泪骨和颧骨组成，对眼眶周围仔细解剖游离。将眶内容物用一个棉签轻轻拨开即可见到位于眶底部内侧的眶下神经，约1.5 mm粗细。在眶内从近端仔细分离眶下神经至远端的眶下孔，用两根铬肠线（5）间距约2 mm力度适中地结扎在眶下神经上，为达到理想的效果，压迫程度的标准为：在显微镜下可见结扎线使神经的直径略微变细，但尚不阻断神经外膜的血液循环。切口用丝线（5）缝合。在对照组中，眶下神经以同样方法被暴露，但不被结扎［3］。 1.3 行为测试 将各组大鼠分别于手术前1 d,术后7、14、28 、42、56 和70 d行机械刺激反应阈值测试。机械刺激反应阈值是由STOELTING.WOOD DALE,IL公司提供的Von感觉测试器）来测定，刺激部位为眶下神经在面部感觉支配区域——围绕鼻区中央的触须部位及周围有毛皮肤。手持刺激棒缓慢接近大鼠，先在手术的对侧刺激3下，使细丝弯曲，再在手术侧刺激3下，每一强度的细丝共刺激6次。在此过程中，细丝的强度由低到高依次递增。动物的阳性反应包括：(1)经刺激即表现为快速的后退动作，大鼠为避免面部进一步被接触，倦缩身子向笼壁靠拢，或将头面部藏在身下，躲避刺激物。(2)攻击行为。大鼠亦可表现出快速抓咬刺激物，做出攻击动作。(3)非对称性的面部搔抓，表现为至少连续3次搔抓面部刺激区域的动作，通常合并后退动作。出现以上3种反应中任意1项或1项以上即认为是刺激实验阳性，使大鼠产生阳性反应细丝强度最小值即为疼痛反应阈值。观察各组大鼠手术前后对于不同强度细丝刺激产生痛觉反应阈值的变化，与对照组比较，进行统计学分析。 1.4 病理形态学观察 1.4.1 电子显微镜观察 将各组大鼠于手术后10周处死，取眶下神经组织、三叉神经半月节组织标本约1 mm3以4%戊二醛固定，常规电镜制片，在H型透射电镜下观察并摄片，主要观察对象为神经髓鞘、雪旺细胞、神经节细胞内线粒体、粗面内质网及核糖体的超微结构变化。 1.4.2 HE染色 将各组大鼠于手术后10周处死，取眶下神经组织、三叉神经半月节标本以10%甲醛固定、石蜡包埋、切片、常规HE染色，光镜下观察并摄片。观察神经纤维束、三叉神经半月节细胞、雪旺细胞的病理变化。 1.4.3 髓鞘染色 将各组大鼠于手术后10周处死，取眶下神经纤维组织以10%甲醛固定、石蜡包埋、切片，以WEIL液染色，光镜下观察神经髓鞘的变化并摄片。 1.4.4 甲苯胺蓝染色 将各组大鼠于手术后10周处死，取三叉神经半月节组织以10%甲醛固定、石蜡包埋、切片，以甲苯胺蓝染液（苯胺油、甲苯胺蓝、无水酒精组成）经过直入下染色、流水冲洗、二甲苯脱水及换洗等步骤完成。染色后的节细胞被染成蓝色，观察节细胞内NISSL体、细胞核在数量、质量及形态上的改变。 2 结 果 2.1 模型动物的行为学改变 术后12 14 d，实验大鼠眶下神经面部感觉支配区（即触须部皮肤及其周边长毛的部位）对于机械刺激的痛觉敏感